嗜热土壤芽胞杆菌产生的-葡萄糖苷酶(
)是一种耐热纤维素酶,为使其在工业生产中更好地应用,开展了以下试验:
Ⅰ.利用大肠杆菌表达酶
⑴扩增
基因时,选用基因组
作模板。
⑵下图为质粒限制酶酶切图谱。基因不含图中限制酶识别序列。为使
扩增的
基因重组进该质粒,扩增的
基因两端需分别引入和不同限制酶的识别序列。
⑶大肠杆菌不能降解纤维素,但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力,这是因为。
Ⅱ.温度对酶活性的影响
⑷据图1、2可知,80℃保温30分钟后,酶会;为高效利用
酶降解纤维素,反应温度最好控制在(单选)。
A.50℃ B.60℃ C.70℃ D.80℃
Ⅲ.利用分子育种技术提高酶的热稳定性
在扩增
基因的过程中,加入诱变剂可提高
基因的突变率,经过筛选,可获得能表达热稳定性高的
酶的基因。
⑸与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比,上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高,其原因是在过程中(多选)
A.仅针对基因进行诱变
B.基因产生了定向突变
C.基因可快速积累突变
D.基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
地下黑作坊用病死猪肉腌制的腊肉往往含有大量的细菌,可利用“荧光素——荧光素酶生物发光法”对市场中腊肉含细菌多少进行检测:①将腊肉研磨后离心处理,取一定量上清液放入分光光度计(测定发光强度的仪器)反应室内,加入适量的荧光素和荧光素酶,在适宜条件下进行反应;②记录发光强度并计算ATP含量;③测算出细菌数量。分析并回答下列问题:
(1)荧光素接受 提供的能量后就被激活,在荧光素酶的作用下形成氧化荧光素并且发出荧光。根据发光强度可以计算出生物组织中ATP的含量,原因是发光强度与ATP含量成____________(正比/反比);根据ATP含量进而测算出细菌数量的依据是:每个细菌细胞中ATP含量____________。
(2)“荧光素——荧光素酶生物发光法”中涉及的能量转换是__________________;生物细胞中ATP的水解一般与 (吸能反应或放能反应)相联系。
(3)研究人员用不同条件处理荧光素酶后,测定酶浓度与发光强度如图所示。其中高浓度盐溶液经稀释后酶活性可以恢复,高温和Hg2+处理后酶活性不可恢复。
若要节省荧光素酶的用量,可以使用_____________处理; Hg2+处理后酶活性降低可能是因为____________________________。
为探究酶的浓度(以土豆块数多少代表)对酶促反应的影响,某兴趣小组设计了如图所示的实验装置。可供选用的材料用具有:3%的过氧化氢溶液、新鲜土豆(含有过氧化氢酶)、水果刀、量筒、带刻度的50ml注射器(3个)、橡皮塞、计时器.请.回答下面的问题.
(1)实验步骤:
①将新鲜土豆去皮,______________________;
②取3个50ml的注射器编号为A、B、C.___________ ;
③然后_________________________________,如图示装置;
④____________________________________________.
(2)实验中需控制的无关变量有___________、___________等(至少答2点).
(3)如果右图是B注射器的实验结果,与B相比.那么A、C注射器内产生a量气体时所需的时间b应分别为___________、 .
影响酶活性的因素除了温度、pH以外,还有些化学物质能使酶活性增加,称为酶的激活剂;而有些化学物质能使酶的活性降低甚至丧失,称为酶的抑制剂。如Cl一是唾液淀粉酶的激活剂,Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。某兴趣小组设计了如下实验研究。
实验试剂:唾液淀粉酶溶液,3%淀粉溶液,碘液,0.3%NaCl溶液,1%CuSO4溶液,1%Na2S04溶液,蒸馏水。
实验器材:略。
实验步骤:取4支洁净试管,按照下表加入相应的试剂。将4支试管都放入到温度为 ① 水浴锅中保温15min。期间每隔1分钟取样,滴加碘液进行鉴定,观察反应进行情况。
(1)本实验的研究课题为_________________。
(2)①处设置的温度应为_____________;表中②③应添加的试剂量分别为_________________。
(3)设置3号试管的目的_________________。
(4)为确保实验结果的准确性,实验中需要控制的因素有_________________。(写出两项)
(5)1号试管作为空白对照,在第5min时取出的样液,滴加碘液后开始呈现出黄色,说明淀粉已完全被酶催化分解,2号试管______________;3号试管的实验结果与__________号试管的基本相同;4号试管样液呈现出黄色的取样时间比l号试管_________________(填“早”或“晚”)。
现有烧杯、量筒、苹果泥、质量分数为2%的果胶酶溶液、蒸馏水、pH分别为1、2、3、4、5、6的缓冲溶液,下表是某小组利用上述材料进行的有关实验。请回答下列问题:
步骤 |
项目 |
烧杯 |
||||||
A |
B |
C |
D |
E |
F |
G |
||
1 |
① |
2ml |
||||||
2 |
加入不同pH 的缓冲溶液 |
2ml 蒸馏水 |
2ml pH=1 |
2ml pH=2 |
2ml pH=3 |
2ml pH=4 |
2ml pH=5 |
2ml pH=6 |
3 |
烧杯中加入苹果泥 |
20ml |
||||||
4 |
水浴加热 |
45℃ 15分钟 |
||||||
5 |
澄清度检测 |
45% |
53% |
80% |
90% |
97% |
75% |
32% |
(1)该实验是研究________对果胶酶活性的影响,A烧杯在实验中的作用是___________。
(2)表中①处的内容是___________________________________,能否将操作步骤3放至表中步骤1之前,并说明原因_______________________________________________。
(3)步骤4中将7个烧杯45℃水浴保温的原因是_________________________________。
(4)将该实验结果转化成曲线图画在下面坐标系中,分析可知_______时果胶酶活性最高。
将某种植物种子在水中浸透,然后按如图装置进行实验,实验开始时X液面位置与Y液面位置调至同一水平。下表记录了实验过程中每小时的液面变化情况。请回答下列问题:
时间(h) |
X液面位置(cm) |
0 |
5.0 |
1 |
7.0 |
2 |
9.0 |
3 |
11.0 |
4 |
13.0 |
5 |
14.5 |
6 |
15.5 |
7 |
15.8 |
8 |
15.8 |
9 |
15.8 |
(1)实验前浸泡种子的目的是让种子细胞增加 水,使代谢增强。
(2)装置中使用NaOH溶液的目的是 ,X液面变化值表示 。
(3)影响结果准确性的环境因素有 (至少写两个)。为确保实验结果只是由实验装置中种子的生理活动引起的,需设置另一个相同装置,该装置除试管内金属网上需要放 、 的同种种子外,其他条件与上图装置相同。
(4)实验4小时后液面变化减缓乃至不变,原因是 。
已知大麦在萌发过程中可以产生α淀粉酶,用GA(赤霉素)溶液处理大麦可使其不用发芽就产生α
淀粉酶。为验证这一结论,某同学做了如下实验:
试管号 |
GA 溶液 |
缓冲液 |
水 |
半粒种子 10个 |
实验步骤 |
实验 结果 |
|
步骤1 |
步骤2 |
||||||
1 |
0 |
1 |
1 |
带胚 |
25 ℃保温 24 h后去 除种子, 在各试管中 分别加入 1 mL淀粉液 |
25 ℃保温10 min后各试管中分 别 加 入 1 mL碘液,混匀后观察溶液颜色深浅 |
++ |
2 |
0 |
1 |
1 |
去胚 |
++++ |
||
3 |
0.2 |
1 |
0.8 |
去胚 |
++ |
||
4 |
0.4 |
1 |
0.6 |
去胚 |
+ |
||
5 |
0.4 |
1 |
0.6 |
不加种子 |
++++ |
注:实验结果中“+”越多表示颜色越深。表中液体量的单位均为mL。回答下列问题:
(1)α淀粉酶催化 水解可生成二糖,该二糖是 。
(2)综合分析试管1和2的实验结果,可以判断反应后试管1溶液中的淀粉量比试管2中的 ,这两支试管中淀粉量不同的原因是 。
(3)综合分析试管2、3和5的实验结果,说明在该实验中GA的作用是 。
(4)综合分析试管2、3和4的实验结果,说明 。
萌发的禾谷类种子中淀粉酶活性较强,主要有α–淀粉酶和β–淀粉酶。α–淀粉酶不耐酸、较耐热,在pH为3.6以下迅速失活,而β–淀粉酶不耐热,在70 ℃条件下15 min后失活。
实验材料:萌发3天的小麦种子(芽长约1 cm)。
主要试剂及仪器:麦芽糖标准液、5%淀粉溶液、斐林试剂、蒸馏水、恒温水浴锅等。
实验步骤:
步骤一:制作麦芽糖梯度液。取7支干净的具木塞刻度试管,编号,按表加入试剂,再将试管置于60 ℃水浴中加热2 min,取出后按试管号顺序排列。
试剂 |
试管号 |
||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
麦芽糖标准液(mL) |
0 |
0.2 |
0.6 |
1.0 |
1.4 |
1.6 |
2.0 |
蒸馏水(mL) |
2.0 |
1.8 |
1.4 |
1.0 |
X |
Y |
Z |
斐林试剂(mL) |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
步骤二:利用萌发3天的小麦种子制备淀粉酶溶液。
步骤三:将装有淀粉酶溶液的试管置于70 ℃水浴中15 min,取出后迅速冷却。
步骤四:另取四支试管,编号A、B、C、D,向A、B试管中各加5mL5%淀粉溶液,向C、D试管中分别加入2mL已经处理的酶溶液(忽略其中含有的少量麦芽糖)和蒸馏水,将四支试管置于40 ℃恒温水浴锅中保温10min,然后将C、D试管中的溶液分别加入到A、B试管中,摇匀后继续在40 ℃恒温水浴锅中保温10min。
步骤五:取A、B试管中反应溶液各2 mL分别加入E、F试管,然后向E、F试管分别加入________,________,观察颜色变化。
结果分析:将E试管中颜色与步骤一中获得的麦芽糖标准液进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出α–淀粉酶催化效率。
请分析回答:
(1)本实验的目的是______________________________________________________。
(2)步骤一的5~7试管中加入蒸馏水的量(X、Y、Z)分别是________(单位:mL)。
(3)实验中B试管所起的具体作用是________。
(4)请补全步骤五的做法:______________,____________。
(5)若要测定另一种淀粉酶的活性,则需在步骤________进行改变。
酶是由活细胞产生的一类具有生物催化作用的有机物,生物体内的化学反应,基本上都是在酶的催化下进行的。请根据下列有关酶促反应的实验操作,回答相关问题。
注:表中“+”为加入,“-”为未加入
(1)制备淀粉溶液时需加热煮沸,但制备好以后必须冷却到室温才能使用,这是为了防止_____________。
(2)上述实验中,能与斐林试剂发生反应生成砖红色沉淀的试管有 和 。
(3)实验过程中,如果E、F号试管也出现砖红色沉淀,可能有很多原因,下列分析正确的是(用序号表示) 。
①淀粉溶液、蔗糖溶液不纯,混有还原糖。
②淀粉溶液、蔗糖溶液放置时间太长,其中的微生物将部分淀粉、蔗糖分解成还原糖。
③试管不干净、上面留有还原糖。
④实验操作过程中,胶头滴管混用、错用。
(4)如果条件所限,只保留两支试管,也能初步得出酶具有专一性的实验结论,请你写出可能的组合:___
(5)本实验中,能否用碘液代替斐林试剂? (能/不能),理由是
(6)若研究温度对淀粉酶活性的影响,可否用斐林试剂为检测试剂? 理由是
。能否用过氧化氢酶研究温度对酶活性的影响 __________。
Ⅰ.下图是探究pH影响过氧化氢酶活性的实验装置图,请回答下列问题。
(1)肝脏研磨液可以用________来代替。除了自变量和因变量外,本实验哪些是无关变量(答出主要两点)?________________________________________________。
(2)若要验证酶的高效性,在此实验装置的基础上,应如何改进(请写出具体操作)______________。
(3)能否用本实验装置来验证温度影响酶的活性? ,请说明理由___________________。
(4)酶的化学本质是________。
Ⅱ.低温迫使植物细胞产生大量对细胞有害的过氧化物,如脂质过氧化物(MDA)。超氧化物歧化酶(SOD)能够消除过氧化物,从而增强植物的抗冷性。研究人员进行了“水杨酸对水稻幼苗抗冷性的影响”实验,实验步骤及结果如表所示。
组别 |
处理 |
培养温度/℃ |
![]() |
1 |
蒸馏水浇灌 |
25 |
7.3 |
2 |
① |
② |
9.4 |
3 |
0.5 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
10.3 |
4 |
1.0 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
11.6 |
5 |
1.5 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
13.6 |
6 |
2.0 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
8.5 |
7 |
2.5 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
7.9 |
8 |
3.0 mmol/L水杨酸浇灌 |
5 |
6.5 |
(1)表中①是________________,②是________。
(2)组别1和2对照可得的结论是_________________________________________。
(3)在5 ℃的环境下,物质的量浓度为2.0 mmol/L的水杨酸对水稻幼苗抗冷性的影响是________(填“增强”或“减弱”)。
已知大麦在萌发过程中可以产生α-淀粉酶,用GA(赤霉素)溶液处理大麦可使其不用发芽就产生α-淀粉酶。为验证这一结论,某同学做了如下实验:
试管号 |
GA 溶液 |
缓冲液 |
水 |
半粒种子10个 |
实验步骤 |
实验结果 |
|
1 |
0 |
1 |
1 |
带胚 |
步骤1 |
步骤2 |
++ |
2 |
0 |
1 |
1 |
去胚 |
25oC保温24h后去除种皮,在各试管中分别加入1mL淀粉液 |
25oC保温10min后各试管中分别加入1mL碘液,混匀后观察溶液颜色深浅 |
++++ |
3 |
0.2 |
1 |
0.8 |
去胚 |
++ |
||
4 |
0.4 |
1 |
0.6 |
去胚 |
+ |
||
5 |
0.4 |
1 |
0.6 |
不加种子 |
++++ |
||
注:实验结果中“+”越多表示颜色越深,表中液体量的单位均为mL。 |
回答下列问题:
(1)α-淀粉酶催化 水解可生成二塘,该二塘是 。
(2)综合分析试管1和2的实验结果,可以判断反应后试管1溶液中的淀粉量比试管2中的 。这两支试管中淀粉量不同的原因是 。
(3)综合分析试管2、3和5的实验结果,说明在该实验中GA的作用是 。
(4)综合分析试管2、3和4的实验结果,说明 。
研究发现豚鼠血清对人淋巴瘤细胞有抑制作用,而对正常细胞无影响。进一步研究发现,发挥作用的物质是L—天冬酰胺酶,它能将L—天冬酰胺分解,而淋巴瘤细胞自身不能合成该氨基酸,增殖被抑制。
(1)为验证该酶对两种细胞的影响,某兴趣小组进行了以下实验。
实验材料:正常细胞、淋巴瘤细胞、培养基(含细胞生长所需物质)、L—天冬酰胺酶
实验步骤:
a.分组
实验组:培养基 + L—天冬酰胺酶 + 淋巴瘤细胞
对照组:培养基 + ___________
b.适宜条件下培养后,观察细胞生长状态、检测L—天冬酰胺含量。
实验结果(如下表):
实验分组 |
生长状态 |
L—天冬酰胺含量 |
|
培养液 |
细胞内 |
||
实验组 |
|
缺乏 |
缺乏 |
对照组 |
正常 |
缺乏 |
正常 |
结果分析:
该实验利用了酶的__________特性;表中①应为__________;对照组细胞内L—天冬酰胺含量正常的原因是 ______________ 。
(2)患者多次静脉注射该外源性酶后疗效降低,是因为发生了____________反应;该酶口服无效,原因是____________。
(3)根据实验结果,你认为理想的抗肿瘤药物应该具有的特性是_______________。
已知大麦在萌芽过程中可以产生α-淀粉酶,用GA(赤霉素)溶液处理大麦可使其不用发芽就产生α-淀粉酶。为验证这一结论,某同学做了如下实验:
试管 号 |
GA 溶液 |
缓冲 液 |
水 |
半粒 种子 10个 |
实验步骤 |
实验 |
|
步骤1 |
步骤2 |
结果 |
|||||
1 |
0 |
1 |
1 |
带胚 |
25 ℃保 温24 h 后去除 种子, 在各试 管中分 别加入 1 mL淀 粉液 |
25 ℃保 温10 min 后各试 管中分 别加入 1 mL碘 液,混匀 后观察 溶液颜 色深浅 |
++ |
2 |
0 |
1 |
1 |
去胚 |
++++ |
||
3 |
0.2 |
1 |
0.8 |
去胚 |
++ |
||
4 |
0.4 |
1 |
0.6 |
去胚 |
+ |
||
5 |
0.4 |
1 |
0.6 |
不加 种子 |
++++ |
注:实验结果中“+”越多表示颜色越深。表中液体量的单位均为mL。
回答下列问题:
(1)α-淀粉酶催化________水解可生成二糖,该二糖是________。
(2)综合分析试管1和2的实验结果,可以判断反应后试管1溶液中的淀粉量比试管2中的________,这两支试管中淀粉量不同的原因是___________。
(3)综合分析试管2、3和5的实验结果,说明在该试验中GA的作用是____。
(4)综合分析试管2、3和4的实验结果,说明_____。
研究人员从一种野生植物的贮藏根中提取出一种化学物质,有人认为是一种能促使葡萄糖分解的酶,有人认为是一种能促使蔗糖分解的酶。对此,研究人员设计并做了一些相关实验。
(1)要鉴定此物质化学本质是蛋白质还是RNA,可分别选用________试剂和________染液。
(2)要确定此物质是催化葡萄糖分解的酶还是催化蔗糖分解的酶,研究人员设计了如上图所示的实验过程,请分析可能的实验结果。在水浴加热后,若两支试管均出现砖红色沉淀,说明____________________________,若两支试管均不出现砖红色沉淀,则说明_____________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________。
(3)若以上实验完成后,已经确定其为催化葡萄糖分解的酶,化学本质是蛋白质,需要确定其催化作用的最适温度,设计实验的基本思路是先确定____________________________,再参照上图中甲试管的处理方法进行实验。实验结束后,再选择其中砖红色沉淀最少的两支试管所对应的温度,设置____________,重复进行实验。
ATP是生物体内能量代谢中重要的高能化合物,其作为药物用于临床对癌症、心脏病、肝炎等病症的治疗或辅助治疗,效果良好。目前常以葡萄糖为能源物质,利用啤酒酵母进行工业化生产。请分析:
图1 图2
(1)ATP的结构简式是________,上图中可以合成ATP的场所有________(填序号)。
(2)葡萄糖进入酵母菌细胞的方式是________。在没有葡萄糖的情况下,酵母菌会分泌一种蔗糖转化酶,将蔗糖分解成单糖以便吸收利用,在分泌蔗糖转化酶时,除图1所示结构外,还需要________________________的参与。
(3)根据图2分析在O2浓度为________时,酵母菌有氧呼吸和无氧呼吸消耗的葡萄糖的量相等。进一步研究发现,O2浓度会影响酵母菌对葡萄糖的利用和ATP的生成,实验结果如图3所示。在该实验时间内,比较三种情况下酵母菌对葡萄糖的利用速率________,通气量为____________时,有利于ATP的生成。
图3