毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
（1）过程①中最常用的运载工具是______，所需要的酶是限制酶和_________。
（2）在过程②中，用_______处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是______________。
（3）在过成③中，用_________处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行_________处理。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。
根据国外统计，白血病约占肿瘤总发病率的3%左右，是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤。由于基因突变导致白血病患者体内白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制。
（1）科研工作中往往利用患白血病大鼠制备转基因模型，从胚胎工程角度探究治疗白血病。
卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠________中获取。上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。如果后代大鼠骨髓恢复正常造血功能，说明此转基因动物模型具有治愈白血病的研究价值。
（2）治疗白血病目前采取的较先进治疗措施是基因治疗，基本步骤是：
治疗该白血病的目的基因是指 基因，病毒在此治疗中的作用是 。
（3）目前治疗白血病的最好办法是生物免疫治疗，从患者外周血中采集单核细胞，进行体外培养及诱导，以获取成熟的，具有肿瘤细胞识别能力的DC细胞和杀伤力的CIK细胞。将这两种细胞犹如打点滴一样回输到患者体内，用它们来对肿瘤细胞进行特异性杀伤。选择从患者体内采集细胞而不从其他正常人体内采集的原因是 。
如图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，据图回答：
（1）图中①一般用 处理可以得到③。
(2)为了使乳汁中含有人类血清白蛋白，需要获取仅在 ___细胞中特异性表达的目的基因启动子，在基因工程中，我们称②为 ，能实现②进入③的常用方法是 。
(3)下列A～D中表示④到⑤过程中正确的操作方法的是 ，把⑤送入⑥的最佳时期是 。
(4)④到⑤过程中称为 ⑤的数量能不能太多， 为什么？
(5)⑦是⑥生出的后代，那么⑦的遗传性状是否和⑥相似？ ，为什么？
(6)用这种方法生产药物与工厂化生产药物相比，优越性在于 。
（7）为检测人类血清白蛋白是否成功表达在分子水平上可采用________技术
(8)⑦和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物，这类转基因动物被称为________。
下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：
(1)过程①使用的 酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过 而结合。 过程②需要用到 酶，
(2图中A的名称是____________，它重组成功的物质基础是__________________ __________的结构组成相同。
(3)A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为 。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取 __与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交，。
（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成 ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和 酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。
（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G′GATCC—。
请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图
农业科技工作者在烟草中找到一种抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉细胞中，培育抗病棉品系。请回答下列问题。
（1）要获得该抗病基因，可采用从基因文库中获取、 等方法。将抗病基因转入棉细胞时，最常用的运载体是 。
（2）若运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图示：
则能与该运载体连接的抗病基因分子末端是( )
（3）切割完成后，需用 酶将运载体与该抗病基因连接，得到 分子。
（4）将抗病基因转入棉细胞时，可先将重组DNA分子导入农杆菌 的T-DNA上，再用该农杆菌去侵染棉细胞，从组织培养得到的植株中筛选获得抗病棉。
下表中列出几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题。
（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ，原因是 。
（3）与使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。
（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
（5）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光。借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，如图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：
请根据上述材料回答下列问题：
(1)用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、________、________和________等。构建基因表达载体中，启动子是____，它位于基因的首端，是________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。图中过程②常用的方法是________；
(2)GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能，且对细胞无毒性，因此GFP基因可以作为基因表达载体上的________。
(3)目前科学家们通过________工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程是直接改造GFP分子，还是改造GFP基因？________。该工程的基本流程是________________。（用文字和箭头）
科学家通过基因工程，成功培育出能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉，其过程大致如图所示：
(1)细菌的基因之所以能在棉花细胞内表达，产生抗性，其原因是____________________________。
(2)将目的基因导入植物细胞最常用的方法是 ；
(3) 利用基因工程技术培育抗虫棉，与诱变育种和杂交育种方法相比，具有________、______________和__ 等突出的优点，但是目前基因工程仍不能取代杂交育种和诱变育种。与基因工程技术相比，杂交育种和诱变育种方法主要具有_______ _的优点。
青枯病是马铃薯生产中一种危害严重的细菌性病害。1996年，我国科学家首次在世界上获得抗青枯病转基因马铃薯株系，为防治这种毁灭性病害开辟了道路。他们根据存在于昆虫体内的抗菌肽的氨基酸序列，人工设计并合成了几个抗菌肽基因，例如ShivaA,CecropinB等基因，并将其导入马铃薯中，转基因马铃薯获得了青枯病抗性的表型。
（1）在克隆基因过程中，通常采用 技术对目的基因进行扩增，下列由一个DNA分子扩增为两个DNA分子过程的叙述中，正确的序号顺序是 。
①引物与单链相应互补序列结合 ②目的基因DNA受热变性后解链为单链 ③DNA聚合酶作用下复制
（2）基因工程的第二步是 。一个完整的重组DNA分子的组成除了目的基因外还必须有 、 以及 等。
（3）通常用 方法检测新育出的植株染色体DNA上是否插入了抗菌肽基因。
以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。
(1)获得目的基因的方法通常包括 和 。
(2)切割和连接DNA分子所使用的酶分别是 和 。
(3)运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或 ，后者的形状呈 。
(4)由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行 操作。
(5)将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和 序列上是相同的
(6) 大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它 _______
科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如下图据图回答：
(1)人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是
_______________________________________________________
(2)过程①表示的是采取 的方法来获取目的基因。其过程可表示为：
___________________________。
(3)图中(3)过程用人工方法，使体外重组的DNA分子转移到受体细胞内，主要是借鉴细菌或病毒___ 细胞的途径。一般将受体大肠杆菌用 处理，使细胞处于能______________________的生理状态，这种细胞称为_______________细胞，再将表达载体溶于缓冲液中与________________混合，在一定的温度下完成转化。
干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取0.5μg，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素。试分析原理和优点。
（1）从人的淋巴细胞中获取出干扰素基因，一般可用 _______的方法，此基因在基因工程中称为 。
（2）此基因与细菌的质粒相结合要依靠 ，然后将目的基因移植到酵母菌体内，酵母菌在基因工程中叫 。
（3）科学家在培养转基因植物时，常用 中的质粒做运载体。
（4）细菌质粒能与干扰素基因能够拼接其原因是____________________________。人的干扰素基因在酵母菌体内合成了人的干扰素，说明了____________________。
基因工程又叫基因拼接技术。
(1)在该技术中，切割DNA的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的 断开。限制酶切割产生的DNA片段末端有两种形式，分别是 、 。
(2)基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为E·coliDNA、 两类，其中前者只可以连接 ，后者既可以连接 也可以连接 。
应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品，是生物科学技术转化为生产力的重要体现。请据图回答下列问题：
(1)在培育转基因牛的过程中，②过程需要的工具是____________________②过程常用的方法是_______________________________。
(2)转基因牛可通过分泌乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的尾端含有________，首端有启动子，它是RNA聚合酶识别和结合点部位，有了它才能驱动基因转录出__________。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，经移植培育出多头相同的转基因牛犊。
(3)PrG基因的产物能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体， Ⅱ最可能是________细胞。单克隆抗体与常规抗体相比，最主要的优点是 _________ 。
(4)我国在抗虫棉培育过程中，将目的基因导入棉花受体细胞采用最多的方法是________法。④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较， 其优点是____________________， ⑤过程采用的技术原理是________________。
下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据下图回答：
(1)图中①一般经________________处理可以得到③，从③到④的过程中一般利用未受精的去核卵细胞为受体，而不用普通的体细胞，原因是____________________
(2)从A－D中选出④到⑤的过程中正确的操作方法________.把⑤送入⑥的最佳时期是____________________。
(3)⑦是⑥生出的后代，那么⑦的遗传性状和________最相似（填序号）
如果②的数量太少常用________来扩增。要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体是____________，利用该方法得到的动物叫做________。
(4)用这种方法生产药物与工厂化生产药物的优越性在于节约资源、降低成本等。⑦和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物，这类的转基因动物被称为____________。(2分)
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