如图为利用生物技术获得生物新品种的过程示意图。据图回答:
(1)随着科技发展,获取目的基因的方法也越来越多,若乙图中的“抗虫基因”是利用甲图中的方法获取的,该方法称为 。(2分)图中①过程与细胞中DNA复制过程相比,该过程不需要 酶。③是在 (填“酶的名称”)作用下进行延伸的。
(2)在培育转基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因(kanR)常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。乙图为获得抗虫棉技术的流程。A过程需要的酶有 、 。图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是 。C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外,还必须加入 。
(3)离体棉花叶片组织经C、D、E成功地培育出了转基因抗虫植株,此过程涉及的细胞工程技术是 ,该技术的原理是 。(2分)
(4)检测目的基因是否转录出mRNA的具体方法是使用 与提取出的 做分子杂交。
(5)科学家将植物细胞培养到 ,包上人工种皮,制成了神奇的人工种子,以便更好地大面积推广培养。
请回答与转基因小鼠的培育过程相关的问题。
（1）获取外源基因常用的工具酶是 ，若需在短时间内获得大量的某种外源基因，通常采用 技术。
（2）在供体雌鼠发情周期的某一阶段，用一激素处理促使卵巢里大量卵泡成熟并排出，称为超数排卵。在让供体母鼠与健康公鼠交配的同时，让代孕母鼠与结扎公鼠进行交配，使代孕母鼠与供体母鼠的生理条件达到同步或者一致，称为 处理。
（3）将基因表达载体导入受精卵常用的方法是 。
（4）将注射有外源DNA的受精卵移人发育培养液中继续培养至桑椹胚或 ，再进行胚胎移植。进行早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素和 。
（5）待代孕母鼠产出幼仔后，取幼鼠尾巴细胞提取基因组DNA，可用 法等分析以确定是否为转基因鼠。
豇豆对多种害虫具有抵抗能力，根本原因是豇豆体内具有胰蛋白酶抑制剂基因(CpTⅠ基因)。科学家将其转移到水稻体内后，却发现效果不理想，主要原因是CpTⅠ蛋白质的积累量不足。在体外对CpTⅠ基因进行修饰后， CpTⅠ蛋白质在水稻中的积累量得到了提高。修饰和表达过程如图所示：
请根据以上材料，回答下列问题：
(1)CpTⅠ基因是该基因工程中的________基因，“信号肽”序列及“内质网滞留信号”序列之所以能修饰到CpTⅠ上，是由于基本组成单位是____________，在①过程中，要使用________酶切开，暴露出________，再用________酶连接。
(2)在该基因工程中，供体是________，受体是____________。
(3)②过程称为________。
(4)检测修饰后的CpTⅠ基因是否表达的最好方法是
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
下图是某种类似动物蛋白质工程的示意图，请分析回答：
(1)目前蛋白质工程中难度最大的是图中编号________所示过程。
(2)实现③过程所依据的原理是______________________，属于哪种获取目的基因的方法：________。
(3)经过④过程得到目的基因，所采取的手段与基因突变相比最大的特点是______________________________________________________________________________。
(4)⑤过程中对核苷酸序列有严格要求的工具酶是________________，进行⑤过程的目的是_________________________________________________________________。
基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展运用。基因工程基本操作流程如右图所示，请据图回答：
（1）甲是 ，完成图中剪接过程需要 酶的作用。
（2）在上述过程中，遵循碱基互补原则的步骤有： 。（用图解中字母表示）
（3）不同种生物之间的基因能拼接成功，从分子结构角度分析是因为： ，目的基因在不同的生物细胞中能正确表达，说明了不同生物共用 。
（4）研究发现，番茄体内有一种酶可以抑制害虫的消化功能，现科学家已成功的分离出这种基因并导入到玉米的体细胞中，培育出了具有与番茄相似抗虫性状的玉米植株，在此过程中使用了哪些现代生物科技手段？ ，而玉米这种变异的来源属于 (基因突变,基因重组,染色体变异)。
（5）在培育转基因植物时，我国科学家发明了一种“花粉管通道法”， 就是利用植物受精后花粉萌发形成的花粉管通道，将DNA分子注入胚囊中，此过程相当于基因工程操作中的 步骤。若把目的基因导入该植物的叶绿体DNA中，则其产生的配子中 （填“一定”或“不一定”）含有该基因。
下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）①过程如果使用人的肝细胞，则不能成功，原因是
（2）过程②必需的酶是 酶，过程④必需的酶是 酶。
（3）在利用AB获得C的过程中，必须用 切割A和B，使它们产生 ，再加入 ，才可形成C。
（4）为使过程⑧更易进行，可用 （药剂）处理D。
根据基因工程原理，回答以下问题：
Ⅰ：如图是基因工程技术生产胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：
（1）完成过程②、③必需的酶分别是 、 。
（2）在利用A、B获得C的过程中，一般用 酶切割A和B，使它们产生相同的末端，再加入 ，才可形成C。
（3）取自大肠杆菌的物质B，在基因工程中起 作用，必须具备的条件是 。(至少写出两个)
Ⅱ：干扰素是是抗病毒的特效药，成分是一种糖蛋白，传统的生产方法是从人的白细胞内提取，每升人血只能提取0.05μg，所以价格昂贵。现在某基因公司用图示方式生产干扰素：
（1）从人的淋巴细胞中取出 ，使它同质粒相结合，然后移植到酵母菌体内获得干扰素。
（2）科学家成功地把人的干扰素基因移植到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，试分析：
①人的基因之所以能接到植物体内，其物质基础是 。
②烟草有了抗病毒的能力，这表明烟草体内产生了 。烟草植株产生这种新性状(变异性状)的来源属于 。
③若要鉴定干扰素基因是否进入烟草细胞，可采用的检测方法是 ；若要鉴定干扰素
基因是否翻译成干扰素，可采用 。这些检测方法都属于分子检测。
（3）如果将携带干扰素基因的重组质粒导入二倍体植物细胞，经培养、筛选获得一株有抗病毒特性的转基因植物。经分析，该植物的某一染色体携带有目的基因（因此可以把它看作是杂合子）。理论上，在该转基因植物自交F1代中，出现具有抗病毒特性的植物的概率是 。
下图是绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程，请据图回答下列问题。
(1)A过程需要用限制酶切割水母细胞的DNA，不同的限制酶切割后产生的DNA片段末端通常有两种形式：________和________．
(2)C过程需要利用动物细胞培养技术以获得大量的成纤维细胞，其培养过程可经过原代培养和传代培养，但是目前冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，这是为了_____ _。
(3)过程F的技术名称是________。
(4)E过程可从屠宰场已屠宰母畜的卵巢采集________，并在体外培养到________期。
下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答下面的问题。
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_______(填字母代号)。
A．启动子 B．tetR
C．复制原点 D．ampR
(3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化
C．显微注射 D．细胞融合
(4)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析
C．抗原—抗体杂交 D．PCR
过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术可使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示这一技术的基本过程，在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G↓GATCC—，请回答：
(1)从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是________________，人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中需要的酶是_____ ___。
(2)人体蛋白质基因之所以能连接到羊的染色体DNA中，原因是______________________，人体蛋白质基因导入羊细胞的时常用的工具是____ ____。
(3)此过程中目的基因的检测与表达中的表达是指_______________________________。
(4)你认为此类羊产的奶安全可靠吗？理由是什么？
________________________________________________________________________。
在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因A控制合成的抗冻蛋白A有较好的应用价值，通过转基因技术获得抗寒能力提高的植株。回答有关问题：
（1）从深海鱼提取和纯化DNA时，选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中 的特性，达到分离目的，加入一定量 可以进一步获得含杂质较少的DNA。
（2）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 黏性末端的限制酶。
（3）为了检测A基因转录的mRNA是否翻译成抗冻蛋白A，需从转基因生物提取 ，用相应的抗体进行 。
（4）若要用动物细胞工程技术，制备抗A抗体的杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入 诱导细胞融合。细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为 。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共
有 种不同DNA片段。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。
（每空1分，共12分） 下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）在基因工程中，A表示目的基因，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶是 ；B表示构建的基因表达载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及 等，其中启动子是 酶识别和结合的部位。
（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中②过程常用的方法是 ，使用的绵羊受体细胞为 ，④用到的生物技术主要有动物细胞培养和 。若转基因绵羊可通过分泌的乳汁来生产人类蛋白质，在基因表达载体中，目的基因的首端必须含有 ，这种转基因动物称被为 。
（3）B→D为转基因抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是 ，若使用的棉花受体细胞为体细胞，⑤表示的生物技术是 。要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是 ，以 作为探针。
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的是 。
（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和 两种工具酶。
（3）过程⑥是 。
（4）过程⑦采用的实验技术是 ，获得的X是 。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
抗菌肽在生物体内广泛存在，是生物体用来抵御外来病原体的一类小分子蛋白质。它不仅具广谱抗菌活性，而且对某些病毒、真菌、病原虫和肿瘤细胞也有抑杀作用。在科研和临床上有很大的应用价值。请回答下列问题：
（1）抗菌肽是一类免疫效应因子，是生物体中 免疫的重要组成部分。研究发现，抗菌肽可以在细菌细胞膜上穿孔而形成离子孔道，从而改变细菌细胞膜的 ，引起细胞内容物大量外流，最终导致细菌死亡。
（2）为检测人工合成的家蚕抗菌肽的活性，研究人员进行了如下实验。
①将一定浓度的某金黄色葡萄球菌培养液均匀涂布在固体培养基上，然后在培养基上贴A、B、C三张无菌小纸片。
②在A处滴加含有人工合成的抗菌肽缓冲液，在B处滴加浓度相同且等量的含有 的缓冲液，在C处只滴加 ，培养一段时间后，测量抑菌环的直径推断抗菌肽活性的强弱。
③实验结果：A、B处形成的抑菌环大小相近，说明： ；
C处没有出现抑菌环，说明： 。
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