下列是有关基因工程和细胞工程的问题，请据图分析回答。
（一）科学家通
过基因工程，成功培育出能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉，其过程大致如图所示。
(1) 细菌的基因之所以能“嫁接”到棉花细胞内，原因是 。
(2) 上述过程中，将目的基因导入棉花细胞内使用了______________ 法，这种导入方法较经济、有效。原因是T-DNA的 特点。[Bt毒蛋白基因转入普通棉株的细胞内，并成功表达的过程在基因工程中称为 ；能成功表达的原因是 。目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是 ，还需要通过检测才能知道，检测采用的方法是 。该方法依据的原理是 .
（二）．右图是某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。请据图回答：
(1) 该方案并不能达到预期效果，请你给予补充纠正 。
(2) 图中②为 过程，
目的是使得到的细胞具有 __特性。
(3)图中③表示用特定的选择性培养基进行细胞培养，
目的是 。
(4)破伤风杆菌抗体最终可从 中提取。
转基因食品的安全性目前已成为人们争论的焦点之一,但这样并不能阻止转基因技术应用于生产实践的种种尝试，转基因小牛的诞生就是其中的一例。
人的血清白蛋白在临床上需求量很大，通常从人血中提取。由于艾滋病病毒（HIV）等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。如果应用基因工程和克隆技术，将人们的血清白蛋白基因导入乳牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。大致过程如图：
A．将人的血清白蛋白基因导入雌奶牛胚胎细胞，形成重组细胞①
B．取出重组细胞①的细胞核，注入去核牛卵细胞中形成重组细胞②
C．电脉冲刺激重组细胞②，促使其形成早期胚胎
D．将胚胎移植到母牛的子宫中，最终发育成转基因小牛。
（1）重组细胞①是通过_________工程中的转基因技术，实现了奶牛胚胎细胞中的DNA与人体蛋白质基因重组。
（2）重组细胞②是通过________工程中的___________技术，使重组细胞①的细胞核与去核的牛卵细胞融合。
（3）若将早期的胚胎分离成若干个胚胎细胞。让其分别发育成一头小牛，这些小牛的基因型完全相同，这是因为_________________________________。
（4）实验过程中，重组细胞①的细胞核需要植入到“去核牛卵细胞”中，原因有 （ ）
A．卵细胞的细胞个体较大，易于操作
B．卵细胞的细胞核染色体数目比较少，容易取出
C．利用卵细胞质诱导和激发重组细胞②的“全能性”
D．只有是生殖细胞，才能在母牛子宫中形成胚胎
阅读下列材料并回答有关问题：ω-3脂肪酸是深海“鱼油”的主要成分，它对风湿性关节炎以及糖尿病等有很好的预防和辅助治疗作用。目前，人们主要通过食用深海鱼肉摄取ω-3脂肪酸，这造成人们过度捕杀深海鱼而严重破坏了海洋生态系统。由于ω-3脂肪酸去饱和酶可在普通猪体内将其富含的ω-6 饱和脂肪酸转变成ω-3脂肪酸，于是，科学家从一
种线虫中提取出ω-3 脂肪酸去饱和酶基因，然后将该基因导入猪胚胎干细胞，再将这种胚胎干细胞在体外培养一段时间后植人正常猪的子宫，以期得到富含ω-3脂肪酸的转基因猪。目前还不知道这些转基因猪肉能不能吃，也不清楚这些小猪长大以后能否保持较高水平的ω-3 脂肪酸。
（1）从线虫中提取目的基因需要特定的____________酶，此酶的特点是____________。
（2）构建基因表达载体中，启动子的化学成分是________________________，它位于基因的首端，是____________酶识别
和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出 mRNA 。
（3）请列举培育富含ω-3脂肪酸的转基因猪需利用到的三种现代生物技术。
____________________________________________________________________________
（4）用于培养胚胎干细胞的培养基中
____________（成分）通常是用于培养植物细胞的培养基所没有的。
（5）你对培育这种转基因猪有何评价？_________ ___。
（6）建造海底人工鱼礁是实现海洋渔业可持续发展的举措之一，这体现了生态工程所遵循________________________的原理。
番茄营养丰富，是人们喜爱的一类果蔬。但普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。操作流程如图。请据图回答。
（1）在筛选出含重组DNA的土壤农杆菌时通常依据质粒上的 的表达。
（2）在该番茄新品种的培育过程中，将目的基因导入受体细胞的方法叫做 。
（3）从图中
可见，mRNA1和mRNA2的结合直接阻碍了多聚半乳糖醛酸酶合成时的 过程，最终使番茄获得抗软化的性状。
（4）为防止转基因番茄通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，可将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入到番茄植物细胞的 （结构）中。
下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：
（1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入 ，该培养基按用途划分属于。
（2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是 ；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的 方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过 实验来实现。
（3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。
① 在构建的T—DNA过程中，还应该具有和 等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。
②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？ 。
将人的抗病毒干扰素基因“嫁接”到烟草的DNA分子中，可使烟草获得抗病毒的能力，形成转基因产品。请分析回答：
（1）烟草转基因产品的获得属于（ ）。
| A．基因工程 | B．细胞工程 | C．发酵工程 | D．酶工程 |
（2）人的基因之所以能接到植物中去，原因是 。
（3）烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生了 。
（4）不同生物间基因移植成功，说明生物共用一套 ，从进化的角度看，这些生物具有 。
（5）烟草DNA分子被“嫁接”上或“切割”掉某个基因，实际并不影响遗传信息的表达功能。这说明 。
（6）该工程用于实践，将给农业、医药等许多领域带来革命，目前己取得了许多成就，请你列举你所知道的或你所设想应用该工程的两个具体实例。
。
（7）有人认为，转基因新产品也是一把双刃剑，如水能载舟也能覆舟，甚至可能带来灾难性的后果，你是否支持这一观点？如果支持，请你举出两个可能出现的灾难性后果的实例。
______________________________________
___________________ 。
（8）有人提出“吃基因补基因”，你是否赞成这种观点，试从新陈代谢的角度简要说明理由。
。
抗草胺磷（一种除草剂）转基因大豆的培育过程如图所示。
（1）用________________处理，获得上图中所示的“来自矮牵牛的抗草胺磷基因”、含有抗四环素基因的“质粒”。其中质粒上“抗四环素基因”的作用是___________________。
（2）图中①应为____________________________________________________________。
（3）部分农杆菌不能在培养基（含四环素）上生长的原因是___________________________。
（4）在A→D过程中，A→B过程在恒温箱中________（填“避光”或“光照”）培养，注意观察、记录______________________________________________________________的生长情况。
（5）转抗草胺磷基因成功的大豆植株内，抗草胺磷基因能够高效表达，其高效表达的观察指标是_____。
（6）从某种蛋白质的氨基酸序列出发，利用________方法获得目的基因，通过基因工程可以生产自然界中不存在的蛋白质。下列有关基因工程中运载体的描述，正确的是________。（多选）
| A．能够在宿主细胞中复制并稳定保存是运载体的必备条件之一 |
| B．一种运载体只能运载一种目的基因 |
| C．使用的运载体有质粒、λ噬菌体衍生物和动植物病毒等 |
| D．基因表达载体的构建是一样的，不因受体细胞种类、目的基因导入方法的不同而有所差异 |
下图为DNA分子的切割和连接过程，据图回答下列问题：（每空1分）
（1）EcoRI是一种 酶，其识别序列是 ，切割位点是 与 之间的 键。切割后产生的DNA片段末端称为 。
（2）不同来源的DNA片段“缝合”，需要的酶应是 ，它们根据来源可分为 和 两类。
（3）若切割下的目的基因进行PCR扩增。试回答下列问题：
①扩增的前提，是要一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合
成 。
②扩增的过程是：目的基因DNA受热 后解链为单链，再通过一个称为复性的环节后，新的子链开始合成。新的子链合成过程中需要在 催化作用下才可以不断延伸。如此重复循环多次。
下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：
（1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？ ，为什么？
(2)过程②、③必需的酶分别是 、 。
(3) 在利用AB获得C的过程中，必须用___ 切割A和B，使它们产生相同的_ ，再加入 ，才可形成C。
(4) 为使过程⑧更易进行，可用 (药剂)处理D等。
(5)图中的D是基因工程中的__ 细胞，能作这种细胞的有 等。
人的一种凝血因子基因，有186000个碱基对，能够编码2552个氨基酸、试计算凝血因子基因中外显子的碱基对在整个基因碱基对中所占的比例，该数据说明什么问题？
1979年，科学家将鼠体内的能够产生胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中发现了胰岛素。如下图所示，请据图回答：
（1）图中［2］、［5］、［3］、［7］表示通过________________________________的途径，获得_________的过程。
（2）图中［3］代表_________，在它的作用下将_________和_________切成_________末端。
（3）经［9］_________的作用将［7］、［6］“缝合”形成［8］_________DNA分子。［8］往往含有_________基因，以便将来检测。
（4）图中［10］表示将_________的过程，为使此过程顺利进行，一般须将［11］用_________处理，以增大［11］细胞壁的_________。
（5）［11］表示［8］随大肠杆菌的繁殖而进行_________。
（6）如在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素，说明________________________________。
（每空2分，共16分）饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪、禽等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排除后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为重要的饲料添加剂之一。请回答下列问题：
（1）磷元素不可能出现在下列哪个/哪些分子或结构中？______________。
A.核糖 B.核膜 C.核糖体 D.腺苷
（2）饲料加工过程温度较高，要求植酸酶具有较好的高温稳定性。利用蛋白质工程技术对其进行改造时，首先必须了解植酸酶的________________，然后改变植酸酶的氨基酸序列，从而得到新的植酸酶。
（3）为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程，据图回答：
①图中基因组文库________________（小于/等于/大于）cDNA文库；
②A、C过程中________________（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株；
③目的基因I和II除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中哪些分子为模板直接进行PCR扩增？________________________________。PCR反应包含多次循环，每次循环包括三步，即__________________→__________________→__________________。
④将植酸酶基因导入水稻细胞最常用的方法是__________________。
（4）为了提高猪对饲料中磷的利用率，科学家将带有植酸酶基因的重组质粒转入猪的受精卵中。该受精卵培养至一定时期可通过________________方法，从而一次得到多个转基因猪个体。
（每空1分，共10分）我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：
（1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和________
__________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA/RNA）。（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。
（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含________________________________的混合气体培养箱中进行培养。
（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。
（5）去核的卵母细胞与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。利用物理或化学方法刺激重组细胞，使之完成细胞______________________________，在体外培养成重组早期胚胎。
（6）在进行过程⑦操作前，应用激素对受体母猪进行__________________处理。
（7）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。
A.动物细胞培养 B.胚胎移植
C.胚胎细胞核移植 D.DNA重组技术
材料：玉米的光合效率较水稻的高，这与玉米中磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）有很大的关系。如何将玉米的这一种酶转移到水稻等植物上一直是植物生物学家的研究课题之一。但实践证明，常规杂交育种手段很难如愿以偿。最近，有人利用土壤农杆菌介导法，将完整的玉米PEPC基因导入到了水稻的基因组中，为快速改良水稻的光合作用效率，提高粮食作物产量开辟了新途径。
（1）玉米和水稻很难利用常规杂交手段杂交的原因是 。
（2）获得PEPC基因后，将其导入土壤农杆菌的质粒中，以获得重组质粒，需要的工具酶是 。
（3）用含有重组质粒的土壤农杆菌感染水稻细胞，即使感染成功，PEPC基因通过一定途径整合到水稻的基因组中，但不一定会表达，原因最可能是（ ）
A．玉米和水稻不共用一套密码子
B．水稻中缺乏合成PEPC的氨基酸
C．PEPC基因受到水稻基因组中相邻基因的影响
D．整合到水稻基因组中的PEPC基因被水稻的某种酶破坏了
（4）PEPC基因在水稻细胞中成功表达的标志是 。
（5）得到PEPC基因成功表达的水稻细胞后，科研人员常采用 方法获得转基因水稻植株。
（6）若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：牛乳腺蛋白基因的启动子、 、_________________、终止子和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是 （显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是 （受精卵、乳腺细胞）。
干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入牛的基因组中，培育出的奶牛在乳汁中含有人体干扰素。下图1是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，图2是图1中A阶段部分过程。请分析回答：
（1）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是 、基因表达载体的构建、 和 。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、 、＿＿＿＿ 、＿＿＿＿ 和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺细胞）。
(2) B操作指 。A应保证发育到 阶段，才能进行B操作。
(3)为同时获得多个完全相同的子代个体，可在进行B操作之前进行________________。
(4)除了按上述培育转基因牛的方法来生产干扰素外，人们还提出了通过分离效应T细胞并进行体外培养让其大量增殖，来生产大量干扰素的设想。请你运用细胞工程的原理，提出一个简单而可行的设计思路： 。(2分)
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