基因工程又叫基因拼接技术。
(1)在该技术中，切割DNA的工具是限制酶，它能识别某一特定核苷酸序列，使两个核苷酸之间的 断开。限制酶切割产生的DNA片段末端有两种形式，分别是 、 。
(2)基因工程中常用“分子缝合针”是连接酶，根据酶的来源不同可分为E·coliDNA、 两类，其中前者只可以连接 ，后者既可以连接 也可以连接 。
已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下：
(1)实验步骤①所代表的反应过程是____________________________________。
(2)步骤②构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用_____________________________________________________________。
(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其原因是S基因在大肠杆菌中不能________，也不能______________。
(4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特征，可用________与________进行抗原—抗体特异性反应实验，从而得出结论。
(5)步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________(选填“相同”或“不同”)，根本原因是_________________________________________________________________。
2011年11月，武汉大学利用细菌将人的血清白蛋白基因导入水稻体内，借助水稻合成了人的血清白蛋白，这种蛋白质和人体自然产生的这类物质是完全一致的，这一成果轰动了生物界。结合图示回答转基因水稻培育过程的相关问题。
(1)限制酶Mun Ⅰ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。为保证重组质粒表达载体的准确构建，应该怎样操作？______，________，________。
(2)②过程常用的细菌是________。
(3)③经历的生理过程主要有________和________两个阶段。培育出转基因水稻完整个体所依据的生物学原理是__________________________________。
(4)基因工程的最后步骤是目的基因的检测与鉴定，在此步骤可对培育的植株进行分子水平的检测，可检测的物质有______________、____________、______________。
农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。下图为农杆菌转化法示意图，请据图回答问题。
(1)Ti质粒多存在于细菌中，它是能自我复制的________。
(2)获取外源基因(目的基因)需要限制酶的参与，而目的基因在重组过程中需要________酶的参与，并依据碱基________原则进行重组。
(3)Ti质粒原存在于________中，其上的TDNA具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的________上的特点，因此携带外源基因的DNA片段必须插入到________部位。
(4)农杆菌转化法适于将目的基因导入________和祼子植物，而不易于感染大多数________。
(5)若将相关的目的基因导入动物细胞或微生物细胞则常采用________和________。
肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
图1
图2
请回答有关问题。
(1)进行过程①时，需用________酶切开载体以插入let7基因。
(2)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(3)研究发现，let7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。下图是转基因抗冻番茄的培育过程示意图。
(1)若图中Ⅱ是科学家构建的鱼抗冻蛋白基因的表达载体，则该基因表达载体的组成通常应包括____________________等。
(2)科学家常采用________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用________技术检测目的基因是否插入番茄的基因组。
(3)多聚半乳糖醛酸酶(PG酶)可将成熟的番茄果实细胞壁中的多聚半乳糖醛酸降解为半乳糖醛酸，从而导致果实软化。抑制PG酶的活性可以延长番茄果实储藏期，请用文字描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。
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