科学家通过杂交瘤细胞培养生产单克隆抗体的过程如图所示。请回答：
（1）生产单克隆抗体一般不直接培养B淋巴细胞，主要原因是__________________________。
（2）图①中将______________注入小鼠体内，而后从小鼠脾脏中获得B淋巴细胞。
（3）在单克隆抗体制备过程中之所以选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，是因为它们融合后的杂交瘤细胞具有____________________________________________的特性。
（4）单克隆抗体制备过程运用了___________和____________的动物细胞工程技术手段。
（5）细胞培养过程中，培养液需添加一定量的 ，以防止杂菌污染；在含5%CO2的培养箱中进行培养时CO2的主要作用是 。
（6）除上述过程获得抗体外，再写出一种目前应用动物组织和细胞培养技术生产的生物制品：_________________。
Ⅰ.甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。
回答下列问题：
（1）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，获得具有活力的 ，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成 组织，然后经过 形成完整的杂种植株。这种培育技术称为 。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指 。
假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是 。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的 等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
Ⅱ.科学家通过诱导黑鼠体细胞去分化获得诱导性多能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠。流程如下：
（1）从黑鼠体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为 ，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为 。
（2）图中2-细胞胚胎可用人工方法从灰鼠输卵管内获得，该过程称为 ；也可从灰鼠体内取出卵子，通过 后进行早期胚胎培养获得。
（3）图中重组囊胚通过 技术移入白鼠子宫内继续发育，暂不移入的胚胎可使用 方法保存。
（4）小鼠胚胎干细胞（ES）可由囊胚的 分离培养获得。iPS与ES细胞同样具有发育全能性，有望在对人类iPS细胞进行定向 后用于疾病的细胞治疗。
(10分)下图是某实验室做的通过动物纤维母细胞等获得单抗的实验研究。据图回答相关问题。
（1）X、Y、Z细胞的名称分别是 、 、_ 。
（2）①过程类似于植物组织培养技术中的 过程。与纤维母细胞相比，诱导干细胞的全能性较 。②过程的实质是 。
（3）③过程中需用到的生物诱导剂是 。
（4）④处需要筛选，其目的是 。
（5）用32P标记的核苷酸的培养基培养Z细胞，细胞质中能测到32P的细胞器有 和 。
甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。回答下列问题：
(1)为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用________酶和________酶去除细胞壁，获得具有活力的________，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成________组织，然后经过________形成完整的杂种植株。这种培育技术称为______________。
(2)上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指_____________________________。若甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是_____________________。
(3)这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的____________________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：
据图回答下列问题：
（1）过程①所需要的酶是 ，过程②体现了生物膜的 特点。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和双亲植株的根尖，通过 、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较 。
请回答下列有关胚胎工程和基因工程的问题：
(1)将胚胎干细胞置于子宫内发育成一个个体，体现了胚胎干细胞具有 。将早期胚胎分割、移植可获得多个同卵胚胎，这属于动物的 方法。
(2)利用造血干细胞可以治疗白血病，造血干细胞移植之前先要进行培养。动物细胞培养一般分为 和
两个阶段，和植物细胞培养不同的是，培养时除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，营养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入 ；向培养液中通入95%氧气和5%二氧化碳，氧气参与细胞的代谢，二氧化碳可以维持培养基的 。
(3)目的基因的表达与鉴定是基因工程的重要环节。用 法可以在分子水平上检测是否翻译成了相应蛋白质。用实施基因工程的小麦做抗虫或抗病的接种实验，若仍患病，则必须再对 进行改造或修饰，重新进行基因工程的操作。
(11分)下图是植物组织培养的简略表示。
据此回答：脱分化 再分化①——→②——→③——→④
（1）①表示 _ __，它能被培养成为④的根本原因是 。
（2）②表示 ，它与①相比分化程度 ，全能性 。
（3）若想制作人工种子，应该选用（填编号） 。
（4）若①是花药，则④是_________________，继续对其使用 处理可获得 正常植株，该过程称为________________________________。
（5）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草素，培养将进行到（填编号） 。
2007年诺贝尔生理学或医学奖授予马里奥·卡佩基等三位科学家，以表彰他们“在涉及胚胎干细胞和哺乳动物DNA重组方面的一系列突破性发现”。这些发现导致了“基因敲除”技术（通常叫基因打靶）的出现，利用这一技术可以准确地“敲除”DNA分子上的特定基因，从而为研究基因功能开辟了新途径。该技术的过程大致如下：
第一步：分离胚胎干细胞。从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞，在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：突变DNA的体外构建。获取与靶基因同源的DNA片断，利用基因工程技术在该DNA片段上插入neoR基因（新霉素抗性基因），使该片段上的靶基因失活。
第三步：突变DNA与靶基因互换。将体外构建的突变DNA转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到添加新霉素的培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）“基因敲除技术”以胚胎干细胞作为对象是因为胚胎干细胞具有 性。
（2）在第三步中，涉及的变异类型是 。
（3）在靶基因中插入neoR基因的目的 。
（4）假设经过上图表示的过程，研究者成功获得一枚“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，并培育成一只雌性克隆小鼠，则：
①该克隆小鼠的后代是否都含有neoR基因，为什么? ， 。
简述如何利用上述小鼠才能获得符合需要的小鼠： 。
②若该克隆雌鼠与普通小鼠交配，理论上该克隆雌鼠产下抗新霉素小鼠与不抗新霉素小鼠的比例为 。
下面是烟草叶片原生质体分离和培养的流程图：
请回答：
（1）酶解时，在纤维素酶和果胶酶的混合液中，还需添加 来提高混合液的渗透压，以利于获得完整的原生质体。
（2）获得原生质体后，可用 方法检测原生质体是否存活。然后将原生质体制成悬浮液，滴加在 上，用显微镜观察并计数。要判定原生质体是否已形成细胞壁，可用 方法鉴别。
（3）欲通过原生质体培养得到愈伤组织，从培养基的成分考虑，配制培养基时需要注意的主要方面有哪些？
【生物一一选修3现代生物科技专题(15分)
中科院动物所和福州大熊猫研究中心合作，通过将大熊猫的体细胞核植入去核的兔子的卵母细胞中，在世界上最早克隆出一批大熊猫早期胚胎，这表明我国的大熊猫繁殖研究再次走在世界前列。
(1)克隆大熊猫过程中应使用的技术手段主要有 和 。
(2)克隆大熊猫与克隆羊在受体细胞选择上的不同点是 。
(3)实验中选取的兔子的卵细胞实际是处于 期的卵母细胞。
(4)科学家们将大熊猫的体细胞核放入兔子的去核卵母细胞之中，成功发育至 时期，即可进行胚胎移植。于此同时还要用激素对“代孕母体”作 处理。
(5)假如用胚胎分割的方式来克隆大熊猫的话，依据的原理是 ，胚胎分割时应注意的问题是 。
（11分) 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答问题。
(1)制备单克隆抗体过程中要用到________和________技术。
(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的________免疫
(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________(2分)成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②在HAT培养基上存在_________种细胞，最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是____________________________________(2分)。
(4)此过程生产的单克隆抗体可以与____________特异性结合，从而诊断早孕。
(11分)“白菜—甘蓝”是科学家用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易储存等优点。如图是“白菜—甘蓝”培育过程示意图，请完成下列问题：
(1)培育成白菜—甘蓝植株，采用的技术手段是________。该过程应用的原理是＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
(2)要制备“白菜—甘蓝”的人工种子，要在d步骤选取具有生根、发芽能力的________结构，包裹上人工种皮即可。
(3)在d过程培养中，培养基的成分通常包括水、______、有机营养和________等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证__________________。
(4)在a过程中诱导原生质体融合最常用的诱导剂是______________．
(5)要获得图中白菜和甘蓝的原生质体，首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。用以下材料和用具：紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等,可除去细胞壁。在实验过程中要选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是
_______________________________________________________(2分)。
（6）采用特异性引物对另两种植物花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种及纯种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中后代性状不分离的是 。
2012年诺贝尔生理学或医学奖获得者约翰·格登和山中伸弥在“体细胞重编程技术”领域做出了革命性贡献。请回答下列问题：
（1）约翰·格登通过实验把蝌蚪已分化体细胞的 移植 进入卵母细胞质中，并成功培育出“克隆青蛙”。在这个过程中用到的胚胎工程技术有 和 。
（2）山中伸弥将4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞，即iPS细胞。在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因进入成纤维细胞的 ，它能够携带外源基因进入受体细胞，并整合到其染色体 上。
（3）iPS细胞与胚胎干细胞一样，具有发育的 ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。
（4）获得的iPS细胞可能用于治疗人类的某些顽症，请试举一例： ；还可能培育出人造器官，解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后 的问题。
红豆杉能产生抗癌药物紫杉醇，为了培养产生紫杉醇的柴胡，科研人员将红豆杉（2n=24）与柴胡（2n=12）进行了不对称体细胞杂交。
（1）科研人员剥离红豆杉种子的胚作为外植体接种于经过_________处理的培养基上，诱导形成愈伤组织。选用胚作为外植体是因为胚的分化程度低，易于_____________。
（2）将红豆杉愈伤组织和柴胡愈伤组织用_____________酶分别处理，各自获得有活力的原生质体。用一定剂量的紫外线照射红豆杉原生质体，破坏部分染色体，与未经紫外线照射的柴胡原生质体用化学诱导剂_____诱导融合，得到融合细胞。
（3）诱导融合后，科研人员只统计了7组染色体数目不大于24条的细胞，如下表所示。
①科研人员筛选的目标细胞不包括染色体数目大于24条的细胞，因为柴胡细胞染色体数为12条，并且红豆杉细胞______________。
②实验时，科研人员判断组号为________的细胞为杂交细胞，并进一步采用PCR方法鉴定这几组细胞。PCR扩增DNA时，需要分别以________为引物，扩增红豆杉、柴胡和杂交细胞的DNA，观察并比较扩增DNA的电泳结果。
（4）红豆杉和柴胡的________较远，两种植物细胞的染色体间排斥较为明显，应在能够高效合成紫杉醇的杂交细胞中选择________的核基因含量较低的杂交细胞进行培养。
植物叶肉细胞原生质体分离和培养的主要过程可用下面的图解简单表示。
（l）图中“酶解”所用的酶应该包括 、 。
（2）原生质体的结构包括 、 、 三部分。
（3）用于植物组织培养的培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有 、 等植物激素。
（4）一般在培养基上培养24～48 h后，大部分原生质体已再形成细胞壁。此时取样，利用质量分数为25 ％的蔗糖溶液以及其他用具，通过 实验来鉴别细胞壁是否已经再生。
（5）愈伤组织再分化形成的胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了 。
（6）若为了获得三七的细胞产物，则只需培养到 阶段；若为了获得三七的人工种子。则需要培养到 阶段。
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