克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞的异常凋亡有关。Bcl-2基因是细胞凋亡抑制基因，用PCR技术可以检测该基因转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。
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[生物——选修现代生物科技专题]
植物叶肉细胞原生质体分离和培养的主要过程可用下面的图解简单表示。
（l）图中“酶解”所用的酶应该包括 、 。
（2）原生质体的结构包括 、 、 三部分。
（3）用于植物组织培养的培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有 、 等植物激素。
（4）一般在培养基上培养24～48 h后，大部分原生质体已再形成细胞壁。此时取样，利用质量分数为25 ％的蔗糖溶液以及其他用具，通过 实验来鉴别细胞壁是否已经再生。
（5）愈伤组织再分化形成的胚状体再继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了 。
（6）若为了获得三七的细胞产物，则只需培养到 阶段；若为了获得三七的人工种子。则需要培养到 阶段。
（每空1分，共12分）人类在预防与诊疗传染性的疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图所示；请回答：
（1）过程①代表的是 。
（2）过程②构建A基因表达载体时，必须使用 和 两种工具酶。
（3）基因表达载体的基本构成除了目的基因外，还包括 、 、 等。
（4）过程③采用的实验技术 是 ，经过③获得的融合细胞有 种，X是 。
（5）获得的X细胞在体外培养既可 ，又可 。
（6）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的A蛋白所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行碱基序列比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
我国科学家成功克隆了控制水稻理想株型的关键多效基因IPA1。研究发现，基因IPA1发生突变后，会使水稻穗粒数和千粒重（以克表示的一千粒种子的重量）增加，同时茎秆变得粗壮，增加了抗倒伏能力。实验显示，将突变后的IPA1基因导入常规水稻品种，可以使其产量增加10％以上。下图表示该水稻新品种的简易培育流程，据图回答：
（1）上图所示流程中步骤①是实验所用技术的核心步骤，构建重组质粒需要的工具酶为_ __。
（2）将重组质粒导入土壤农杆菌之前，常用_ __处理该细菌，以增加该细菌__ _的通透性。
（3）土壤农杆菌的质粒上应该具备_ __以便筛选。
（4）④过程应用的主要生物技术是__ _，原理是_ __，在该技术过程中，以适当配比的营养物质和生长调节剂诱导脱分化，形成_ __，才能得到水稻新品种植株。
（5）从变异类型上分析，该水稻的新性状的出现应该属于可遗传变异中的__ _。
[生物——选修3:现代生物科技专题]植物细胞工程包括植物组织培养和植物体细胞杂交技术等技术。植物组织培养是克隆植物的一种方法,回答相关问题
（1）植物组织培养依据的生物学原理是植物细胞的全能性,在一定的 等条件下,植物细胞可以脱分化形成愈伤组织,将愈伤组织转接到含有 成分的培养基上,就可以诱导其 生成胚状体或丛芽。
（2）植物组织培养过程需要植物生长和繁殖的最适条件,否则在光学显微镜下可观察到发生 异常,进而使植株出现遗传不稳定或不育。
（3）在植物组织培养过程中,愈伤组织的成功诱导至关重要,科学家研究了植物生长调节剂对某药用植株愈伤组织的影响,实验结果如下表:
①诱导形成愈伤组织 (填“需要”或“不需要”)光照的条件。
②从上表可以得出的结论是
（4）植物体细胞杂交技术的关键环节有 、 和植物组织培养。
（每空1分，10分）某二倍体植物是杂合体，图为其花药中未成熟花粉在适宜的培养基上培养产生完整植株的过程。据图回答：
⑴图中①表示的是该花粉培养过程中的__________过程，②表示的是 过程，X代表的是 。
⑵图中从愈伤组织形成完整植株的途径有两条，具体通过那一条途径主要取决于培养基成分中激素的种类及其浓度配比，最后获得的来源于为成熟花粉的完整植株都称为 植株（甲）。未成熟花粉经培养能形成完整植株，说明为成熟花粉具有 。
⑶对植株进行______________________，才能使其结实产生后代（乙），否则植株甲只有通过无性繁殖的方式才能产生后代（丙）。乙、丙两种植株中，能产生可育花粉的是 植株，该植株群体中每一植株产生可育花粉的基因组成种类数为 种，该群体植株产生可育花粉的基因组成种类数为 种。这种育种方式的优势是 ，从而开辟育种新途径。
研究发现豚鼠血清对人淋巴瘤细胞的增殖和生长有抑制作用，而对正常细胞无影响。进一步研究发现，发挥作用的物质是血清中的L-天冬酰胺酶，它能将L-天冬酰胺分解，而淋巴瘤细胞自身不能合成该氨基酸，导致增殖和生长被抑制。
（1）为验证该酶对两种细胞的不同影响，某兴趣小组进行了以下实验，请完善空缺部分：
实验材料：正常细胞、淋巴瘤细胞、培养基（含细胞生长所需的物质）、L-天冬酰胺酶
实验步骤：
第一步：分组。
甲组：适量培养基 ＋ 适量L-天冬酰胺酶 ＋ 适量淋巴瘤细胞；
乙组：等量培养基 ＋ 等量生理盐水 ＋____________________；
丙组：等量培养基 ＋________________________________________；
丁组：等量培养基 ＋ 等量生理盐水 ＋____________________；
第二步：细胞培养。
将各组细胞在相同、适宜条件下培养一段时间。
第三步：观察或检测：
采样以后，应以_______________________________________为指标进行观察和检测。
（2）某疾病患者需静脉注射一种外源性酶进行治疗，多次注射后疗效会明显降低，你认为可能的原因是____________________________________________________________。
通过细胞工程技术，利用甲、乙两种高等植物的各自优势，培育抗病、耐盐的杂种植株。请回答问题：
（1）A处理目前最常用的方法是： 。B的名称是 。
C是具有 优良性状的幼芽。PEG的化学名称叫 。
（2）将状况相同的目的植株绿叶分成6组，在不同温度下先光照l h，接着立刻再暗处理l h（除外界温度不同外，光照强度等其它实验条件适宜并相同)，测其重量变化，得到如下表的数据(“＋”表示增加,“ －”表示减少)。
| 实验组别 |
第一组 |
第二组 |
第三组 |
第四组 |
第五组 |
第六组 |
| 外界环境温度 |
26℃ |
28℃ |
30℃ |
32℃ |
34℃ |
36℃ |
| 光照后重量变化 |
＋3mg |
＋4.2mg |
＋6.1mg |
＋5.8mg |
＋5mg |
＋3.8mg |
| 暗处理后与光照后重量变化 |
－1mg |
－2mg |
－3mg |
－4.2mg |
－5.5mg |
－5mg |
用以上6种温度值回答（以下每空1分）：
①该目的植株光合作用的最适外界环境温度是 ℃，
②目的植株细胞呼吸作用最弱的温度是 ℃，
③白天对目的植株增产最（净同化量）有利的温度是 ，
④植物生理学上将植物体的叶绿体光合作用合成的有机物的量称为植物体的总同化量；而植物体的净同化量=总同化量 — 细胞呼吸消耗的有机物的量。请你从酶促反应的角度分析植物体的总同化量与净同化量分别达到最大值时的最适合温度不同的原因：
卡罗琳斯卡医学院2012年10月8日宣布，将2012年诺贝尔生理学或医学奖授予约翰格登和山中伸弥，以表彰他在“体细胞重编程技术”领域作出的革命性贡献。请回答下列问题：
（1）约翰格登于1962年通过实验把蝌蚪已分化体细胞的细胞核移植进入卵母细胞质中，并成功培育出“克隆青蛙”。由于动物细胞的全能性会随着动物细胞______程度的提高而逐渐受到限制，直到今天也还不能用类似_____ _（某种植物细胞工程的技术手段）的方法获得完整的动物个体。“克隆青蛙”的培育成功，说明了 。
（2）山中伸弥于2006年把4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞。在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因进入成纤维细胞的_______（基因工程的工具），它能够携带外源基因进入受体细胞，并整合到其染色体的DNA上。
（3）所谓“体细胞重编程技术”即将成年体细胞重新诱导同早期干细胞状态，即获得iPS细胞，iPS细胞与胚胎干细胞一样，具有发育的_______，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。
研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。
（1）选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中___________（填“低表达”或“高表达”）。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图12所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建___________区基因，转入原核细胞表达并提纯。
（2）将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠的脾脏细胞与___________细胞进行融合，使用的化学诱导剂是______________，细胞融合的原理是_________________。
（3）将融合细胞在__________培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，应用____________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
（4）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过_______________或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体。
（5）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体______________的特点。
图1和图2分别表示两种获取胚胎干细胞的途径。图1表示的是科学家把4个与胚胎发育相关的特异性基因导入成年小鼠细胞，培养出了诱导多潜能干细胞，称为iPS细胞，类似于胚胎干细胞样细胞，再将iPS细胞转入小鼠乙体内培养，结果如图所示。图2表示研究人员利用小鼠（2N="40)" 获取单倍体胚胎干细胞的一种方法，哺乳动物单倍体胚胎干细胞技术是遗传学研究的新手段。请分析并回答下列问题：
（1）图1过程中，通常选择传代培养 代以内的成纤维细胞导入特异性基因；成纤维细胞转变为iPS细胞，类似于植物组织培养中的 过程。
（2）克隆培养iPS细胞时，需要加入一定量的 ，以防止杂菌污染。早期研究发现在 iPS 细胞诱导培养的过程中会出现大量不具备干细胞功能的细胞，若用维生素C处理，能显著提高iPS细胞的诱导成功率，推测其原因是 。
（3）研究人员将iPS细胞团注射入缺乏T细胞的小鼠体内，细胞团能继续生长。由此可推测图1中iPS细胞团逐渐退化的原因是 。
（4）图2中，研究人员需要对实验小鼠丙注射促性腺激素使其 ，从而获得更多的卵母细胞，再利用SrC12溶液处理、激活卵母细胞，并在体外培养至［④］ 期，再利用流式细胞仪筛选出单倍体细胞。
（5）研究发现，单倍体胚胎干细胞也能分化，形成不同功能的细胞、组织和器官，该技术培育的单倍体动物可成为研究 （填“显性”或“隐性”）基因功能的理想细胞模型。
[生物—选修3：现代生物科技专题](15分，除标注外每空2分)
自然条件下，哺乳动物不发生孤雌生殖。2014年3月，云南农大科研团队把猪卵母细胞进行人为的孤雌激活处理，使其发育成胚胎，移植到代孕母猪体内，获得世界上第一批成活的孤雌生殖克隆猪。这种克隆猪不同于核移植获得的克隆猪，现将两种技术进行比较。
(1)图中过程①②③④是获得孤雌生殖克隆猪的技术流程，那么获得核移植克隆猪的技术流程是过程 （填序号）。
(2)孤雌生殖克隆猪仍然是二倍体生物，但由于缺失 方亲本基因，导致其生长发育中出现多种问题，给研究者提供了很好的材料。
(3)孤雌激活处理其实质是要激活卵母细胞 ，使其发育成早期胚胎，得到克隆猪。
(4)体细胞核移植技术中也会用到卵母细胞，需要选择 时期的卵母细胞，并用微型吸管吸出 。
(5)早期胚胎移植时，必需移植到同种， 的其他雌性动物子宫中，才可能移植成功。
(6)可以从良种不同的克隆猪中提取mRNA进行研究，也可通过 方法得到多种cDNA， 并通过
技术扩增产物。
如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程；图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答下面的问题。
(1)在图1中注射到小鼠体内的物质是__________。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞，此类细胞的特点是_____ _____。该过程所用的生物技术有____________________。
(2)图3中过程①是植物细胞形成__________的阶段，该阶段所用的酶是___ ____。
某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量 。
（2）细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是 。
（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长 。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更 。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用 消化处理。
（4）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入 ，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的 或 合成水平的差异，确定Y的药效。
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