I某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养时，通常在培养基中加入适量动物血清，其原因是___________________________。
（2）在两种细胞生长过程中，当甲、乙细胞铺满瓶壁时，其生长________。
（3）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的________。
（4）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入________，B组细胞培养液中加入等量的无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的________________合成水平的差异，确定Y的药效。
II如图表示用生物工程制备人抗A抗体的过程。请回答下列问题。
（1）人的红细胞膜表面有被称为凝集原的特异糖蛋白，从免疫学角度看，这种凝集原是________。
（2）图中细胞1是小鼠体内注入人A型血红细胞后获得的免疫B淋巴细胞，每个这种细胞具有产生 的特点，但难以在体外培养。甲培养皿中培养的细胞2，是从患骨髓瘤的小鼠体内获取的骨髓瘤细胞，这种细胞在体外培养时能快速大量增殖，但不会产生抗体。
（3）把经诱导融合而形成的细胞3放在乙培养皿中进行培养，则能产生大量的细胞群，这种方法称为________。
（4）过程①的主要目的是______________________。通过过程②或③的培养方法能产生大量________ 抗体。
若下图中甲、乙、丙所代表的结构或物质如表中所示，则相应的叙述与图示不符的（ ）
| 选项 |
甲 |
乙 |
丙 |
相应的叙述 |
| A |
植物体一部分 |
愈伤组织 |
植物体 |
若甲离体培养，则①过程表示脱分化，②过程包括再分化 |
| B |
二倍体 |
花粉 |
单倍体 |
经①和②过程形成的丙一般含有一个染色体组， ③表示用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗 |
| C |
下丘脑 |
垂体 |
甲状腺 |
①为促甲状腺激素激素释放激素，③表示的激素对甲和乙都能起到反馈调节作用 |
| D |
基因 |
mRNA |
蛋白质 |
①不同于②的碱基配对方式为T－A；在原核细胞中，①② 过程可在细胞同一区域同时发生 |
下列关于酶的作用的叙述，正确的是
| A．唾液淀粉酶可催化淀形成葡萄糖和果糖 |
| B．RNA聚合酶能催化转录过程，也能使DNA中的氢键断裂 |
| C．一种限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因 |
| D．胃蛋白酶能作用于离体的动物组织，使其分散成单个活细胞 |
I．紫杉醇是从红豆杉树皮中提取的高效抗癌物质，细胞培养生产紫杉醇是扩大紫杉醇来源的重要途径。
（1）研究人员将细胞培养液分别置于低温条件下处理12h、24h后分别取样计算分裂指数，步骤如下：
①制片：取红豆杉细胞培养液，滴一滴细胞悬浮液于载玻片上，加上 染色，几分钟后，盖上盖玻片，轻轻压片。
②观察并记录：上图所示视野中a细胞所指的细胞时期是____ ，为了统计数据更加科学，统计时应该注意 ，本实验提高细胞分裂指数的最佳处理组合是____ （温度及处理时间）。
（2）已知大蒜素具有与紫杉醇相似的抗癌作用，为探究紫杉醇与大蒜素联合使用对癌细胞的杀伤作用，应设计若干个培养组，对照组加入的是供选材料和试剂A+B，其它各组分别是____。
供选材料：
| A．卵巢癌细胞株SKOV3 供选试剂： |
B．动物细胞培养液 | C．生理盐水 | D．紫杉醇 E．大蒜素 |
Ⅱ．大麦种子结构如下图，其中胚乳中含有大量的淀粉．有同学对大麦种子进行了如下实验，回答有关问题：
（1）实验组别l和组别2的结果说明赤毒素由大麦种子的_ ___产生，然后诱导合成____ ，使储藏的淀粉分解。
（2）大麦种子去胚后，加赤霉素处理，其中的淀粉 （会，不会）被分解。
（3）大麦种子去糊粉层后，再加赤霉素处理，其中的淀粉___ （会，不会）被分解。
（4）实验组别1和组别3的结果说明 。
Ⅰ.土壤农杆菌能将自身Ti质粒的T-DNA整合到植物染色体DNA上，诱发植物形成肿瘤。T-DNA中含有植物生长素合成酶基因（S）和细胞分裂素合成酶基因（R）,如图1所示，它们的表达与否能影响相应植物激素的含量，进而调节肿瘤组织的生长与分化。基因工程常用Ti质粒作为运载体，图2表示抗虫棉培育中使用的三种限制酶A、B、C的识别序列以及Ti质粒上限制酶切割位点的分布，抗虫基因内部不含切割位点，两侧标明序列为切割区域。
（1）据图2分析，切取抗虫基因时，使用限制酶 ，切割Ti质粒时，使用限制酶 。
（2）成功建构的重组质粒含有限制酶A的识别位点 个，若用酶C处理该重组质粒，将得到 个DNA片段。
（3）若抗虫基因插入的位置在R基因内部，筛选出 植株即是成功导入抗虫基因的棉花植株。
Ⅱ.单克隆抗体技术在生物工程中占有重要地位。请回答相关问题：
（4）科学家米尔斯坦和柯勒提出单克隆抗体制备技术的实验方案：把一种 细胞与能在体外大量增殖的 细胞进行诱导融合，使融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。
（5）在技术操作中，需要将融合细胞用 培养基进行筛选，并进行克隆化培养和 检测，以得到足够数量的符合要求的 （填“单”、“双”、“多”）核杂交瘤细胞。
（6）若将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，可从 中提取出大量的单克隆抗体。
（7）研究人员应用 ，改造了鼠源性抗体分子的结构，降低了鼠源性抗体的人体反应。
在矮牵牛的体内能合成一种能抗除草剂的物质即抗草胺磷，下图是利用矮牵牛来培养转基因大豆的过程。
(1)图中①应为________________。在构建①的过程中，要用到的对识别的序列具有特异性的酶是________________。
(2)在将①导入土壤农杆菌之前，往往要用______处理土壤农杆菌，使之成为____细胞，然后将它们在缓冲液中混合培养以完成转化过程。
(3)②中的部分农杆菌不能在含四环素培养基上生长，其原因是_______________________。
(4)A→B过程需要在恒温箱中_________培养，注意观察、记录_________的生长情况。
(5)人工种子是以图中_________(用字母和箭头表示)过程中形成的_________、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过____________包装得到的种子。
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的过程是 ，过程⑦的实验技术名称是 。
（2）过程③构建出的表达载体必须要含有 、 、 和目的基因等结构。
（3）过程⑥发生的生理过程是 。
（4）生产药物时可用微生物做受体细胞，那么④应采用 处理，使受体细胞处于 ，从而将表达载体导入受体细胞；药物生产也可用乳腺生物反应器，那么④则应采用 的方法，从而将表达载体导入受体细胞。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 作疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行 比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
下图为某基因型AaBbDD的雌性动物细胞生命历程中的部分过程，请据图回答问题
（1）上图中过程①为________________分裂，甲细胞的名称为________________。
（2）若图甲中1表示性染色体，则2、3、4表示_____________，与本次分裂同时产生的配子的基因型为________________。
（3）乙细胞经过②过程形成的子细胞中分化成了不同种类的细胞，从根本上说，这是____________________________的结果；但是也有部分细胞变成了癌细胞，这是因为在致癌因子的作用下，_________________发生了突变。
（4）PM2.5是指大气中直径小于或等于2.5微米的颗粒物，也称为可入肺颗粒物。PM2.5的浓度值以每立方米的微克值来表示，目前中国的标准是24小时平均浓度小于75微克/立方米为达标。随着全国各地空气出现严重污染，我国多个城市发生雾霾天气，PM2.5屡屡爆表。同学们想了解PM2.5的空气是否对细胞发生影响，设计了如下实验，请根据实验方案回答问题。
实验材料：在雾霾天气收集到的PM800的空气，经过净化后的新鲜空气，生理盐水，细胞培养液（含有全部营养物质与等量的小鼠胚胎干细胞），试管等。
实验的主要步骤如下表所示：
 试管编号步骤 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
| I |
加入等量的细胞培养液（含有全部营养物质与等量的小鼠胚胎干细胞） |
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| II |
计算培养皿内的细胞数目，记录数据 |
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| III |
密闭培养，并通入 a |
密闭培养并通入 b |
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| IV |
在冰箱中培养，并适时的震荡搅拌 |
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| V |
一段时间后，观察试管内的细胞____c______ |
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①完成步骤Ⅲ，a： ；b： ；c：_______________
②纠正上述步骤中的错误： 。
③预测一种最可能的结果并得出相应的结论
结果_____________________________________________________________；
结论______________________________________________________________。
食品安全人们日益关注。一种保鲜剂——青鲜素，能抑制植物细胞生长与分裂从而抑制发芽，被用于蔬菜和水果的保鲜，但其残留会损害人体健康。根据材料回答下列问题。
（1）青鲜素和 (一种植物激素)的作用类似，它是人工合成的对植物的生长发育有调节作用的化学物质，是属于 。
（2）青鲜素残留毒性可能会使 发生突变，导致正常细胞生长和分裂失控而变成癌细胞。
（3）科研人员以小鼠为实验材料，用“动物细胞培养技术”对青鲜素毒害性进行了检测。
①请完善检测青鲜素毒性的实验:
主要实验步骤:
第一步:取大小相同的六只培养瓶编号为1－6，分别加入等量的相同培养液和小鼠细胞。
第二步:向1号培养瓶中加入生理盐水，向2－6号培养瓶中分别加入 。
第三步:培养一段时间后，取样制成临时制片，用显微镜观察， 。
结果如下表：
| 培养瓶编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
| 添加剂中青鲜素浓度（mg/L） |
水 |
10 |
30 |
90 |
270 |
810 |
| 变异细胞比例 |
0 |
0 |
1/106 |
1/106 |
2/106 |
8/106 |
结论: 。
②该实验检测有毒物质毒性的指标是 ，所用培养液中需要加入的特殊营养成分是 。
铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：
（1）选用新生营养芽为外植体的原因是___________________________，诱导外植体形成PLBs的过程称_______________。
（2）与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在______________，_______________________，___________________________。
（3）脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案时探讨了一下问题：
①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基______________后按比例加入。
②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为__________。
③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的_______________________时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
科学家利用逆转录病毒，将c-Myc（原癌基因）、Klf4（抑癌基因）和Oct-3/4、Sox2四个关键基因转入高度分化的体细胞内，让其重新变成一个多功能iPS细胞(诱导多能干细胞)，如图所示，为自体细胞移植带来了曙光，请分析回答：
（1）Oct-3/4基因在高度分化的细胞中处于 状态（答活跃或沉默）。依据上图所示的原理，体细胞癌变是__ __等基因异常表达的结果；细胞凋亡是在图中 等基因控制下的细胞_ __过程。（基因填英文缩写）
（2）研究人员利用小鼠体细胞诱导形成的iPS细胞，进一步诱导又获得了心肌细胞、血管平滑肌细胞等多种组织细胞，iPS细胞的这种变化过程称作 ，该过程的实质是 。
染色体的断裂片段在有丝分裂时不能进入子细胞核中，而在细胞溶胶中形成圆形结构，称为微核。通过染色可观察到微核，常用含有微核的细胞数占细胞总数的比例（微核率）来检测有毒物质对细胞的危害程度。某研究小组应用微核检测技术探究不同浓度的氯苯对人类细胞的危害程度。请根据以下提供的实验材料与用具，补充完成实验思路及其它小题。
材料和用具：人成纤维细胞悬浮液、培养液、0.1mg/L氯苯溶液、染色液、显微镜、细胞培养瓶、二氧化碳培养箱等。
（1）实验步骤：
①配制 ，分别等量加入到细胞培养瓶中，另设一只培养瓶不加氯苯化合物，并编号；
②向各培养瓶中加入 的培养液和 ，放入二氧化碳培养箱中培养一段时间。
③取各培养瓶中培养液，染色后分别制成装片，在显微镜下观察， 。
（2）绘制一个用于呈现实验数据的坐标系，并画出最可能的实验结果。
（3）培养液中通常要添加 ，以防培养过程中的污染。用培养箱中通入二氧化碳的目的主要是 。检测微核时可用 溶液作染色剂。
（10分，每空1分）下面是与现代生物科技有关的问题，请回答：
Ⅰ、人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG 单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
（1）制备单克隆抗体过程中要用到____________ 和____________ 技术。
（2）制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于__________，使小鼠产生分泌相应_________的淋巴细胞。最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是________________________。
（3）此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合，从而诊断早孕。
Ⅱ、某研究所在“神舟四号”飞船进入太空后为一对“新人”——黄花烟草原生质体和革新一号烟草原生质体举办了特殊的“婚礼”。 将两个“新人”放入融合器中，当充满液体的融合器加上直流电场，两个原本相互游离的细胞一下子贴到一起，开始了“窃窃私语”。紧接着，在瞬间高压脉冲的作用下，两股细胞质展开了“心灵沟通”。渐渐地，细胞核也扭摆着“亲热”起来，20min后，一个新生命就这样诞生了。
（1）“细胞婚礼”中用到的诱导融合技术是 。
（2）两种烟草原生质体融合时，（只考虑两个细胞融合）可能出现 种融合结果，其中 类型是我们需要的。
（3）植物体细胞杂交技术与传统的有性杂交相比，其突出的优点是 。
某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量__________。
（2）在动物细胞培养时，通常在合成培养基中加入适量血清，其原因是___________。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是____________________________。
（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____________。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用___________消化处理。
（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的_______________。
（5）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入_______________，B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的_______________或_______________合成水平的差异，确定Y的药效。
Ⅰ.囊性纤维化是一种严重的遗传性疾病，导致这一疾病发生的主要原因是编码CFTR蛋白的基因发生突变，下图表示CFTR蛋白在氯离子跨膜运输过程中的作用。
（1）图中所示为细胞膜的 结构，其中构成细胞膜的基本支架是 ，氯离子跨膜运输的正常进行是由膜上 决定的。
（2）在正常细胞内，氯离子在CFTR蛋白的协助下通过 方式转运至细胞外，随着氯离子在细胞外浓度逐渐升高，水分子向膜外扩散的速度 ，使覆盖于肺部细胞表面的黏液被稀释。
Ⅱ.(8分)甲、乙两种化学物质可能有一定致畸、致癌作用，利用动物细胞培养的方法鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱。请依据实验结果完成下列实验报告。
(1)实验步骤：
①制备细胞悬液：用 处理小白鼠胚胎组织离散成单个细胞，制成细胞悬浮液。
②进行细胞培养：
a.取A．B．C三个洁净的锥形瓶，分别加入 。
b.向A．B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，并将培养瓶摇匀；
C瓶加等量生理盐水，作为对照。
c.把3个培养瓶放在37℃的CO2培养箱中培养。
③制作临时装片
④镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于有丝分裂中期的细胞，与小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片进行对比，以确认发生变异的细胞。统计 。
(2)实验结果：
| 培养瓶 |
A |
B |
C |
| 变异细胞占总细胞数 |
1.3% |
12.5% |
0.1% |
(3)请写出实验结论： 。
粤公网安备 44130202000953号
