口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物传染病，目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VP1。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗，过程如下图所示。请据图回答。
（1）口蹄疫病毒的VP1蛋白进入动物体内，能引起机体产生特异性免疫应答。VP1蛋白在免疫反应中称为 。
（2）口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，要获得VP1基因可用 的方法合成DNA，再用 将VP1基因片段切下。
（3）过程⑥的培养基中除了加入各种必需营养物质和 等激素外，还需要添加 筛选出含有重组质粒的叶片小段。
（4）获得表达VP1蛋白的番茄植株以后，需要进行免疫效力的测定。具体方法是：将转基因番茄叶片提取液注射到豚鼠体内，每半个月注射一次，三次后检测豚鼠血液内产生的
的数量。为了使结果可信，应设两组对照，分别注射 和 。
从1978年7月25日世界上第一位“试管婴儿”诞生，至今全球试管婴儿数量已达到400万。从1996年7月5日克隆羊“多利”诞生，至今已成功克隆了多种动物。请分析回答试管婴儿与克隆技术的有关问题：
(1)试管婴儿和克隆动物的培育过程中均会用到的生物技术有____________、__________。
(2)试管婴儿和克隆动物的生殖方式分别属于________和________。
(3)培育试管婴儿时，可通过给母体注射________增加排卵数量，从父亲体内获得的精子需要进行________处理，才能完成受精作用。
(4)克隆动物时，将甲个体的细胞核移入乙个体去核的卵细胞中，由重组细胞培育成个体丙，则个体丙的基因来源于_______________________。
(5)请列举一例克隆技术在医药方面的应用__________________________。
正当中国各界激烈争论转基因水稻安全问题之际，在菲律宾首都马尼拉郊外的一片稻田里，一种被称为“金色大米”的转基因水稻已经悄然收获。这种转基因大米可以帮助人们补充每天必需的维生素A。由于含有可以生成维生素A的β一胡萝卜素．它呈现金黄色泽，故称 “金色大米”。(摘自20l0年4月<新世纪>周刊) “金色大米”的培育流程如图所示．请回答下列问题。(已知酶I的识别序列和切点是一G ↓ GATCC一．酶II的识别序列和切点是一↓ GATC—)。
(1)图中a、b所示获得目的基因的方法是 ，培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是 。图中c称作 ，它的构成除了复制原点、目的基因外，还必须有 、 、 等。
(2)据图分析，在构建c的过程中，目的基因用 (限制酶Ⅰ或限制酶Ⅱ)进行了切割。检验重组载体导入能否成功需要利用 作为标记基因。
(3)过程e运用了细胞工程中的 技术，该技术的理论依据是 ；在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行 和 。
(4)若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过 工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计。
人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
(1)制备单克隆抗体过程中要用到 和 技术。
(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于____________，使小鼠产生分泌相应__________的淋巴细胞。此过程生产的单克隆抗体可以与___________特异性结合，从而诊断早孕。
(3)在B淋巴细胞内DNA合成有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤所阻断。而骨髓瘤细胞的DNA合成没有S途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基（含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷）含有多种成分，其中添加的 成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是 。
③此过程产生的抗体与普通血清抗体相比，具有 特点。
在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。
请据图回答：
（1）A过程需要的酶有__________________________________________。
（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是____________________。
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________________。
（4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用________________作为探针。
（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与_________________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为________。
③若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株占____________%。
油菜的株高由等位基因G和g决定，GG为高秆，Gg为中秆， g g为矮秆。B基因是另一种植物的高秆基因，B基因与G基因在油菜的株高上有相同的效果，并且株高与这两个基因的数量正相关。下图是培育转基因油菜的操作流程。请回答下列问题：
（1）步骤①中用到的工具酶是 ，可用含 的培养基来筛选含有目的基因的油菜受体细胞，目的基因能在植物体内稳定遗传的关键是 。
（2）若将一个B基因连接到了矮秆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，且B基因与g基因位于非同源染色体上，这样的转基因油菜表现为 ，该转基因油菜自交产生的子一代中，高秆植株应占 。
（3）若将一个B基因连接到了中秆油菜的染色体上并在植株中得到成功表达，培育了甲~丁四种转基因油菜（如下图）
①这四种油菜中，丙植株的表现型与其余三种植株不同。理由是 。
②在不考虑交叉互换的前提下，这四种转基因油菜分别自交，子代有3种表现型的是 ，另外还有一种转基因油菜的自交子代也有3种表现型，请在下图中的染色体上标出B基因的位置。
人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，通常从血液中提取。应用现代生物科学技术，将人的血清白蛋白基因导入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白会安全、高效地满足人类需求。下图是利用牛奶乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据下图回答：
（1）以上过程涉及到的动物细胞工程技术有 。
（2）在此基因工程中，获取血清白蛋白基因的主要方法有 （至少答两种）。在①进入③之前要构建基因表达载体，这是基因工程的核心，除目的基因外，基因表达载体还必须含有 ，将①导入③的常用方法是 。
（3）图中②一般经过 处理可以得到③，从③到④的过程中一般利用 作为受体细胞，但要进行去核处理，一般选择在 时期进行。
（4）将⑤送入⑦的最佳时期是 。
毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
(1)过程①中最常用的运载工具是 ，所需要的酶是限制酶和 。
(2)在过程②中，用 处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5% CO2的气体环境中，CO2的作用是 。
(3)在过程③中，用 处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行 处理。
(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎。
为研究铬（Cr）对黑麦细胞的毒性作用，科学家研究了不同浓度的铬（Cr）对黑麦根尖细胞分裂指数（即视野内处于分裂期的细胞数占细胞总数的百分比）和染色体畸变率的影响，实验结果如下表：K2Cr2O7对黑麦根尖细胞有丝分裂指数及染色体畸变率的影响
（1）制作黑麦根尖细胞临时装片，需经过 →漂洗→染色→制片等几个步骤，其中可用 溶液对染色体进行染色。
（2）由表中数据可以看出，促进细胞有丝分裂的K2Cr2O7的最适浓度为 mg·L-1,而在K2Cr2O7浓度≥ mg·L-1时，对黑麦根尖细胞的有丝分裂有抑制作用。
（3）科学家通过在显微镜下观察染色体的 和数目，统计并比较 的染色体畸变率，从而明确了铬（Cr）对黑麦细胞的毒性。
某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量_________。
（2）在动物细胞培养时，为了补充合成培养基中缺乏的物质，通常在合成培养基中加入适量的 。细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是___________________。
（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____________。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更_______。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用___________消化处理。
（4）已知癌细胞X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A．B两组，A组细胞培养液中加入___________，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A．B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A．B两组细胞中的________或_______合成水平的差异，确定Y的药效。
研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。
（1）选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中___________（填“低表达”或“高表达”）。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如右图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建___________区基因，转入原核细胞表达并提纯。
（2）将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠的脾脏细胞与___________细胞进行融合，使用的化学诱导剂是______________，细胞融合的原理是_________________。
（3）将融合细胞在__________培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取有克隆生长的细胞培养孔中的________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用____________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
（4）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过_____________或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体。
（5）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体______________的特点。
（1）基因表达载体含有目的基因、标记基因、启动子和终止子四个部分，其中启动子的作用是 ，而终止子上特殊的碱基序列能够阻碍 的移动，并使其从模板链上脱离下来。
（2）基因工程操作过程中，将目的基因导入植物受体细胞时，一般采用 法，选择 做运载体：若导入动物细胞则采用 法，而细菌作为受体细胞时应用 溶液处理使其成为感受态细胞便于吸收游离的DNA。
（3）动物细胞培养中需要使用胰蛋白酶而不是胃蛋白酶处理分裂能力旺盛的组织或器官，是因为 。细胞培养时培养液中一般需加入动物血清，其作用是 。
（4）胚胎分割技术是指采用机械方法将早期胚胎切割成多个等份，然后经移植后获得同卵双胎或多胎的技术，因后代遗传物质相同，故我们可将此技术认为是 生殖。大量的实验证明同卵多胎成功的概率极低，其可能的原因是 。
人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，通常从血液中提取。应用现代生物科学技术，将人的血清白蛋白基因导入奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白会安全、高效地满足人类需求。下图是利用牛奶乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据下图回答：
（1）以上过程涉及到的动物细胞工程技术有 。
（2）在此基因工程中，获取血清白蛋白基因的主要方法有 （至少答两种）。在①进入③之前要构建基因表达载体，这是基因工程的核心，除目的基因外，基因表达载体还必须含有 ，将①导入③的常用方法是 。
（3）图中②一般经过 处理可以得到③，从③到④的过程中一般利用
作为受体细胞，但要进行去核处理，一般选择在 时期进行。
（4）将⑤送入⑦的最佳时期是 。
毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
(1)过程①中最常用的运载工具是 ，所需要的酶是限制酶和 。
(2)在过程②中，用 处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5% CO2的气体环境中，CO2的作用是 。
(3)在过程③中，用 处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行 处理。
(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎。
为研究铬（Cr）对黑麦细胞的毒性作用，科学家研究了不同浓度的铬（Cr）对黑麦根尖细胞分裂指数（即视野内处于分裂期的细胞数占细胞总数的百分比）和染色体畸变率的影响，实验结果如下。
表：K2Cr2O7对黑麦根尖细胞有丝分裂指数及染色体畸变率的影响
| 实验处理 |
有丝分裂指数（%） |
染色体畸变率（%） |
|
| 对照组 |
4.92 |
0.42 |
|
| K2Cr2O7浓度（mg·L-1） |
20 |
5.84 |
1.93 |
| 40 |
6.15 |
3.03 |
|
| 60 |
5.90 |
2.59 |
|
| 80 |
5.74 |
1.99 |
|
| 100 |
4.52 |
1.17 |
|
| 120 |
4.10 |
0.89 |
（1）制作黑麦根尖细胞临时装片，需经过 →漂洗→染色→制片等几个步骤，其中可用 溶液对染色体进行染色。
（2）由表中数据可以看出，促进细胞有丝分裂的K2Cr2O7的最适浓度为 mg·L-1,而在K2Cr2O7浓度≥ mg·L-1时，对黑麦根尖细胞的有丝分裂有抑制作用。
（3）科学家通过在显微镜下观察染色体的 和数目，统计并比较 的染色体畸变率，从而明确了铬（Cr）对黑麦细胞的毒性。
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