由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。
（1）图甲中，过程①需要的酶有___________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以__________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是_______ 。
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____；推测该同学接种时可能的操作失误是____ ____。该操作过程中需要对哪些实验器材进行灭菌（ ）
A、玻璃刮铲
B、接种针
C、培养基
D、工程酵母菌种
E、酒精灯
（3）对于实验结果分析正确的是：（ ）
A．在培养基中添加碘液进行染色，菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。
B．可挑选透明圈较大的工程菌进行培养。
C．在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌出现的透明圈大小不同。
D．在实验条件适宜时，酵母菌进行孢子生殖，繁殖迅速。
（4）以淀粉为原料，用工程酵母菌在适宜条件下密闭发酵，隔一段时间需要进行排气，其原因是_______ 。
[生物――选修1：生物技术实践]在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。
（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行______处理。
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为____体培养基。对培养基进行灭菌，常采用的方法是______________。实验操作者的双手用________消毒。
（3）在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是________________。
（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是__________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。
（5）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是___________，据此可筛选出目的菌。
请阅读下列材料并回答有关问题：
猪饲料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中，猪由于缺乏有关酶，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排出后易造成环境有机磷污染。下图为对植酸酶进行不同处理时其活性与温度的关系。
（1）生产中从土壤中筛选出产酶菌株，土壤悬液首先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出______。
（2）在产酶菌株的筛选过程中，固体培养基中的添加不溶于水的植酸钙，植酸钙被植酸酶分解后可以培养上产生透明圈，可根据透明圈的____________选择目的菌株。
（3）所得菌株还需要进一步测定植酸酶的活性，活性的测定可以用_____________作为底物，活性可用_____________表示。
（4）在生产中____________________（填“未固定”或“固定化”）植酸酶更适于添加到猪饲料中，使用的最适温度为_____________℃。
乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：
（1）筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用 作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是 。从功能上讲，这种培养基属于 。
（2）培养微生物L前，宜采用 方法对接种环进行灭菌。
（3）纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越 ．
（4）乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的 确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括 、 、离子吸附法及交联法等。
【生物——选修1 生物技术实践】有些科学家欲从污染的土壤中分离筛选出能够高效降解原油的菌株进行大规模培养并应用。请回答问题：
（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。筛选过程中，虽然土壤中微生物含量非常丰富，但在此培养基上长出的微生物菌落非常少，甚至有时一个培养皿中一个菌落都没有，这是因为 。
（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。
（3）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。
请回答下列有关微生物培养和分离的问题。
（1）筛选石油分解菌一般要经过如下的步骤：海水取样→______→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中第二步的目的是______。
（2）培养微生物时，获得纯洁培养物的关键是_________。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_________附近进行。采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿____培养。
（3）在菌种保藏时，对于我们频繁使用的菌种一般采用临时保藏的方法，但这种方法有两个缺点：__________________；_________________。
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行______处理。
（5）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。
根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是________________。
请利用相关的知识回答下列问题：
（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是______________。为了缩短制作时间，可在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入少量陈泡菜液的作用是_______________。泡菜发酵过程中会产生多种酸，其中主要的是乳酸，还有少量的亚硝酸。从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是_____________，原因是_____________。
（2）实验材料的选择直接关系到实验的成败。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部_______的侧枝；月季的花药培养时间一般选在月季的_________期，一般来说，选择_____________期的花粉，花药培养成功率最高。
（3）平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物_______________；划线操作结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌______________。
生物技术实践与人们生产和生活密切相关，也为许多学生将来就业奠定了知识基础和能力基础。请回答下列有关生物技术实践中的问题。
（1）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。常用的灭菌方法有 灭菌、干热灭菌和灭菌。人们常常是从土壤中分离纤维素分解菌。分离纤维素分解菌常用的方法是 。其实验流程是；土壤取样→ 选择培养→ →将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生 的菌落。该培养基从功能上看属于 培养基。
（2）在果醋、果酒、腐乳、泡菜的制作过程中，需要氧气的是 ；在酒精发酵时一般将温度控制在 ℃。发酵后是否有酒精产生，可以用 来检验。
（3）进行菊花组织培养的基本实验操作步骤是：制备MS固体培养基、 、接种、培养、移栽、栽培。花药离体培养时，选择 期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是 。花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中 。
（4）植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、____________和________。
[生物——选修1：生物技术实践]如下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
| 成分 |
含量 |
成分 |
含量 |
| NaNO3 |
3 g |
FeSO4 |
0．01 g |
| K2HPO4 |
1 g |
C6H12O6 |
30 g |
| 琼脂 |
15 g |
H2O |
1 000ml |
| MgSO4·7H2O |
0．5 g |
青霉素 |
0．1万单位 |
（1）依用途划分，该培养基属于 培养基，能在此培养基繁殖的微生物具有的特点是 。
（2）根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型是 。
培养基中的碳源是 。
（3）若用该培养液培养纤维素分解菌，除了要去除一些成分外，还应加入的物质是 ，在筛选纤维素分解菌过程中常用 法。
【生物——选修1生物技术实践】请利用相关的知识回答下列问题：
（1）制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是_____________。为了缩短制作时间，可在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入少量陈泡菜液的作用是______________。泡菜发酵过程中会产生多种酸，其中主要的是乳酸，还有少量的亚硝酸。从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸。这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是_____________，原因是_____________。
（2）实验材料的选择直接关系到实验的成败。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部_______的侧枝；月季的花药培养时间一般选在月季的_________期，一般来说，选择_____________期的花粉，花药培养成功率最高。
（3）平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物_____________；划线操作结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌___________。
请回答下列有关生物技术实践的相关问题：
Ⅰ．生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化学燃料的消耗。科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）。
筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供 ，培养基灭菌采用的最适方法是 法。测定培养液中微生物数量，可选用 法。
Ⅱ．三七是一种名贵中药，其有效成分是三七皂苷，可用萃取法提取。
（1）为了提高提取率，提取前应对三七材料进行预处理，即对其进行 。采用萃取法提取某有效成分时需要加热，一般不用酒精灯直接加热而用水浴加热，因为 。
（2）工业化大量而快速生产三七以提取相关成分，可应用 技术，此过程会使用到 等植物激素，对形成的愈伤组织应当测定其 的含量。
【选修1生物技术实践】微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术．以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作．请回答下列问题：
（1）土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自______________的土壤．
（2）为筛选和纯化该类微生物，从功能上分，应选用_____培养基．常用的接种方法是_____或 ．
（3）接种后，应密封培养的原因是______________，培养一段时间后在培养基上形成降油圈，此时选取______________就可获得高效菌株．
（4）扩大培养过程中需要对微生物进行计数．取0．2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220．则样品中微生物的数量为___个/mL．该统计结果_____（低于、高于）实际值．
生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）
（1）用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_______、_______方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供______，培养基灭菌采用的最适方法是________法。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。
（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的__________技术。
【生物——选修：生物技术实践】回答下列有关微生物发酵技术的相关问题:
（1）酿制葡萄酒首先要选葡萄，通常要选糖分和酸度都很高的，用 试剂检验还原糖的含量。其次要选酵母菌。课外小组用同一种葡萄汁对三种酵母菌进行发酵能力测试，结果如下：
| |
原重（g） |
第一天 |
第二天 |
第三天 |
第四天 |
第五天 |
第六天 |
| 菌种1 |
150．5 |
151．83 |
150．85 |
149．38 |
148．34 |
147．32 |
145．94 |
| 菌种2 |
158．4 |
156．73 |
154．78 |
152．99 |
152．10 |
151．24 |
150．04 |
| 菌种3 |
164．8 |
163．82 |
161．51 |
159．43 |
158．24 |
157．25 |
155．49 |
从表格中培养基重量的变化分析，发酵能力最强的是 。进行发酵前，发酵瓶要注意清洗干净，并且要使用 消毒。
（2）某同学在制作果酒之后,欲进一步制作果醋。他先接种优良的醋酸杆菌，再持续通入无菌空气，进一步发酵。请分析能否得到果醋？ ，原因是 。
（3）制作腐乳、泡菜时，需要氧气的是 ，该过程中起主要作用的微生物是 。
（4）利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。可以从土壤微生物中筛选，制备培养基时，常用 做唯一碳源，制成 （固体、半固体或液体）培养基。
（10 分）从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集 培养→纯 种分离→性能测定。请回答筛选过程中的问题。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境采集菌样，然 后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从 的环境采集，培养厌氧菌的菌样应从 的环境采集。
（2）富集培养是指创设仅适应该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生 物在群落中的数量大大增加，从而实现从自然界中分离出所需的特定微生物的培养方法。对 固氮菌富集培养的培养基应是 培养基；对耐高温淀粉酶菌的富集培养应选择 的培养基，并在 条件下培养。
（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处 理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的 等物质发生 。在微生物研究和教学中应用最 广、效果最好的湿热灭菌法是 灭菌法。
（4）下图中 A、B 是采用纯化微生物培养、用两种接种方法接种产生的效果图解，请分析 接种的具体方法：
AB获得图 A 效果的接种方法是 ；获得图 B 效果的接种方法是 。
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