【生物—选修 生物技术实践】高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。
（1）从用途上来说，Ⅰ号培养基属于 培养基，仅以淀粉作为 源；从物理状态上来说，Ⅱ号培养基属于固体培养基，配制时一般加入 作为凝固剂。
（2）进行①过程的目的是 ；②过程所使用的接种方法是 法。
（3）Ⅰ、Ⅱ号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是 ；一般对配制的培养基采用 法灭菌。
（4）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放 分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈 （大或小）的菌落，接种到Ⅱ号培养基。
从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从______________环境采集。
(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择________________________的培养基，并在_____________条件下培养。
(3)在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在___________条件下进行。
(4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。
获得图A效果的接种方法是______________，图B效果的接种方法是_____________。一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是__________________________，应当怎样操作？__________________________。
生物技术的广泛应用，给社会带来了较大的经济效益，受到社会广泛重视。请回答下列有关问题：
(1)制作泡菜需要测定亚硝酸盐含量，其方法是____________。其原理是：在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成________________，将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。
(2)1995年，美国科学家Mulis因发明了PCR技术而获得了诺贝尔化学奖。PCR和生物体内DNA的复制都必需的条件包括DNA聚合酶、模板DNA、能量、游离脱氧核苷酸和______________；在生物体内DNA复制所必需的，而在PCR技术中不需要的成分是____________。
(3)在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰油中，要求不含有任何添加剂或化学原料，其提取方法主要是______；玫瑰精油的提取需大量原料，通常采用__________________技术实现玫瑰的快速繁殖。
(4)为获得一种能高效降解农药的细菌(目的菌)，向培养基中加入某种化合物，将初步筛选得到的目的菌转到固体培养基中，常采用的接种方法是_______________；实验结束后，使用过的培养基应该进行处理后才能倒掉，这样做是为了________________________。
常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差。科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母。请分析回答下列问题:
(1) 制备酵母菌培养基要进行倒平板操作，待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是 。
(2) 取从自然界中采集的葡萄，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后按图甲所示过程进行酵母菌的纯化培养。
图乙是经过图甲过程A 纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序依次是 (用编号表示)。研究者在图甲过程C 的操作培养过程中，得到了一个经培养后菌落分布如图丙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是 。
(3)将培养基上的酵母菌菌株转接到 的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵。从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因。
(4)将目的基因连接到质粒上，该质粒具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因。将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏 能力的酿酒酵母作为受体菌。
(5)将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以 和 为碳源的培养基中进行发酵能力测试。随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能 ，即所需菌株培育成功。
回答下列有关微生物的问题。
霍乱弧菌（如图）经口感染，通过胃到达小肠，在小肠黏膜细胞的表面生长繁殖并产生霍乱肠毒素，后者导致感染人群腹泻甚至死亡。
（1）霍乱弧菌能穿透粘液层（分布于小肠黏膜细胞表面）通常借助于。
| A． | 肠道的蠕动 |
| B． | 消化液的流动 |
| C． | 细菌鞭毛的运动 |
| D． | 小肠上皮细胞微绒毛的摆动 |
用含硫代硫酸钠、柠檬酸钠、胆酸纳、蔗糖的
培养基（
）能从天然样品中有效地分离出霍乱弧菌。
（2）这种
培养基属于。
| A． | 酸性通用 |
| B． | 碱性通用 |
| C． | 酸性选择 |
| D． | 碱性选择 |
研究显示、霍乱肠毒素为蛋白质，其编码基因位于
噬菌体基因组中．无毒型霍乱弧菌经
噬菌体感染后，会转变为产毒素的菌株，且其子代细菌即便在无噬菌体感染的条件下，同样能稳定维持其产毒素特性。
（3）造成霍乱弧菌这一特点的机制可能是。
| A． | 霍乱肠毒素在霍乱弧菌细胞分裂时分裂子代细胞 |
B． | 霍乱肠毒素能选择性杀死不含毒素编码基因的霍乱弧菌 |
C． | 噬菌体感染霍乱弧菌后增殖了大量且稳定的噬菌体 |
D． | 噬菌体在感染霍乱弧菌期间将其基因组插入至宿主基因组上 |
（4）不食不洁生水和生贝壳类海产品是防止霍乱发生措施之一，这属于传染病预防措施中的。
（5）下列各图中，能准确反映霍乱弧菌疫苗接种者血清中抗霍乱弧菌抗体的浓度随时间变化趋势的是。
| A． |
|
| B． |
|
| C． |
|
| D． |
|
(16分)为了提高蚕丝的产量和品质，科研人员进行了下列研究。
（1）家蚕中雄蚕比雌蚕的丝质好，且出丝率高。已知雄蚕含有两个同型的性染色体ZZ，雌蚕含有两个异型的性染色体ZW。在高温条件下，有的品种蚕卵能孵化，为非敏感型；有的品种蚕卵孵化率极低，为敏感型。利用纯合的不同品种家蚕进行了杂交实验，在高温条件下蚕卵的孵化率（孵化的卵数占总卵数的比率）如下：
| 杂交组合 结果 |
组合一 |
组合二 |
组合三 |
|
| 甲 ♀ × 乙 ♂ |
乙 ♀ × 甲♂ |
丙♀×丁♂ |
||
| 蚕卵的孵化率 |
♀ |
0 |
47% |
0.91% |
| ♂ |
48% |
48% |
46.7% |
由上述组合一、二正反交结果可以推知，控制对高温条件敏感的基因是位于 染色体上的 性基因。组合三亲本中品种丙的表现型为 。高温条件下各组的蚕卵孵化率不同，而在常温下三个组合的蚕卵都能正常孵化，由此说明，利用 和 共同作用可以达到只养雄蚕的目的。
（2）家蚕在饲养过程中容易感染苏云金杆菌导致生病从而影响蚕丝的产量。为研究几种中草药对苏云金杆菌的抑制作用，进行了如下实验：
①配制一定浓度的原液，稀释成不同浓度的单味中草药药液。同时将原液1:1等比例混合为复方药液并稀释备用。
②制备培养基后灭菌，将2ml药液加入培养基中制平板。
③接种苏云金杆菌后置于28°C下培养24h，实验结果如下图所示。
可通过观察 来确定几种中草药的最小抑菌浓度。实验结果说明三种药物在抑菌作用上均存
在 的关系，混合使用时 的作用更重要。
急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题：
(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为____ ____。下面四种菌落分布图中，不可能由用该方法得到的是_____ ___。
(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？________。为什么？___________ _______。
(3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为______ __。
(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？_____________________________。
35~40%的甲醛水溶液（福尔马林）可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程。请分析回答：
（1）②过程的目的是 ，③过程筛选出的是 。
（2）上述实验中，不需要进行灭菌处理的是 ，培养基灭菌的常用方法为 。
（3）由③→④的接种可选用 法，通过培养能获得由 繁殖形成的肉眼可见的___________，也就是菌落。经过⑤过程后，取样测定甲醛浓度，选出甲醛浓度________（最低或最高）的培养瓶，再分离、培养菌株。
（4）为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，进行了相应实验并得到如下结果。由图可知，当甲醛的初始浓度小于1200㎎/L时，菌株 ；当甲醛的初始浓度增高至1600㎎/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是 。
MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如下表。下列说法正确的是
| 组别 |
培养基中的添加物 |
MRSA菌 |
| 1 |
100 μg/mL蛋白质H |
生长正常 |
| 2 |
20 μg/mL青霉素 |
生长正常 |
| 3 |
2 μg/mL青霉素＋100 μg/mL蛋白质H |
死亡 |
A．细菌死亡与否是通过光学显微镜观察其细胞核的有无来确定的
B．第2组和第3组对比表明，使用低浓度的青霉素即可杀死MRSA菌
C．实验还需设计用2 μg/mL青霉素做处理的对照组
D．蛋白质H有很强的杀菌作用，是一种新型抗生素
[生物――选修1：生物技术实践]在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。
（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行______处理。
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为____体培养基。对培养基进行灭菌，常采用的方法是______________。实验操作者的双手用________消毒。
（3）在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是________________。
（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是__________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。
（5）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是___________，据此可筛选出目的菌。
由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。
（1）图甲中，过程①需要的酶有___________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以__________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是_______ 。
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____；推测该同学接种时可能的操作失误是____ ____。该操作过程中需要对哪些实验器材进行灭菌（ ）
A、玻璃刮铲
B、接种针
C、培养基
D、工程酵母菌种
E、酒精灯
（3）对于实验结果分析正确的是：（ ）
A．在培养基中添加碘液进行染色，菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。
B．可挑选透明圈较大的工程菌进行培养。
C．在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌出现的透明圈大小不同。
D．在实验条件适宜时，酵母菌进行孢子生殖，繁殖迅速。
（4）以淀粉为原料，用工程酵母菌在适宜条件下密闭发酵，隔一段时间需要进行排气，其原因是_______ 。
Ⅰ.下面是利用人工湿地净化生活污水（主要含有机物）的原理简图。请据图回答：
（1）人工湿地是一个生态系统，其中芦苇、绿藻、黑藻属于 成分，芦苇属于挺水植物，绿藻属于浮游植物，黑藻属于沉水植物，这一现象体现了群落的 结构。
（2）要维持该生态系统的稳定，在该人工湿地生态系统中，除了以上生物群落外，还必须有 成分。与其他自然生态系统相比，该生态系统能量来源的不同之处是：多了 。
（3）人工湿地可以净化生活污水，但对污水排放量要加以控制，其生态学依据是生态系统的 是有限的。
Ⅱ.赤霉病是由雪腐镰刀菌等真菌感染引起的，广泛发生在小麦等粮食作物上。雪腐镰刀菌代谢产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（简写DON，分子式为C15H20O6）严重影响禽畜生产和人体健康。请分析回答下列问题：
（1）下列微生物与雪腐镰刀菌的细胞结构类似的是 （选填选项前的符号）。
a酵母菌 b醋酸杆菌 c毛霉 d乳酸菌 e大肠杆菌
（2）为探究DON的致畸性是否与细胞的染色体变异有关，可向动物细胞培养液中加入一定剂量的DON，在培养箱中保温培养一段时间后，在显微镜下观察染色体的 。
（3）某同学为筛选专一降解DON的目的菌，配制了下列培养基，在适宜条件下培养：
| 实验步骤 |
取样 |
培养基 |
培养结果 |
| I |
土壤样品 |
葡萄糖，(NH4)2SO4，K2HPO4•3H2O，K2HPO4， NaCl，CaCl2，MgSO4•7H2O，加水定容 |
培养液a |
| II |
1mL培养液a |
同上 |
菌落 |
| III |
挑取单菌落 |
真菌培养基地 |
培养液b |
①为实现筛选目的，步骤I所使用的培养基配方中，应去除 并加入 。
②为实现目的菌的分离和计数，步骤II所使用的培养基中还应加入 制成平板，采用的接种方法是 。
由南京农业大学的李顺鹏教授领导的团队经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术，其原理是通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物，解决了物理、化学处理修复难度大，成本高及二次污染的问题，其中有机磷降解菌专一降解甲基对硫磷(一种含氮有机农药)，并依赖降解产物生存，且降解效果达100%，目前使用该项技术生产的无公害大米经中国绿色食品测试中心检测，无农药残留达到出口标准，获得绿色食品证书。下图是研究人员筛选有机磷降解菌的主要步骤，请分析回答问题：
(1)培养过程中需振荡培养，由此推测该“目的菌”的细胞进行的细胞呼吸方式为 型。在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为氮源的固体培养基上。
(2)对培养基选用的灭菌方法一般是 。
(3)筛选出的纯净的有机磷降解菌菌种，需要长期保存，最好采用 的方法。
(4)如果该种细菌在蛋白质合成过程中，携带天冬氨酸RNA为CUG，则转录成该天冬氨酸密码子的基因的碱基组成为 。
(5)研究人员在筛选有机磷降解菌时，发酵液不慎发生污染，菌群几乎全部死亡，但却侥幸的从中获得了少数可抵抗污染的新菌种，细菌这种新性状的产生来自于 。
(6)为了得到单个菌落，比较简便的接种方法是 ，但该方法不宜对菌落计数，而利于对菌落计数的方法是 。
[生物——选修1：生物技术实验]
无菌操作是微生物接种技术的关键；传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：
（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理 。
①皮肤 ②饮用水 ③牛奶 ④注射器
⑤培养皿 ⑥接种环 ⑦培养基
⑧果汁 ⑨酱油 ⑩手术刀
| A．①②③⑧⑨ | B．④⑤⑥⑦⑩ | C．①②③④⑤⑥⑧ | D．以上全部 |
（2）在微生物的实验室培养中，获得纯净培养物的关键是 。上图是利用 法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：
① 每次划线前要 ；
② 冷却后从上一区划线 开始划；
③ 首尾区 。
（3）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是 ，观察培养基上是否有菌落产生。
（4）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是 。
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