为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上转运肽的基因相连，导入油菜叶片细胞并获得了转基因油菜品种。
（1）如图，选用图中的限制酶 处理两个基因后再用 酶处理，得到 （填图中字母）端相连的融合基因。
（2）将上述融合基因插入上图所示Ti质粒的 中，构建 并导入农杆菌中。
（3）将获得的农杆菌接种在含 的固体平板上培养得到单菌落，利用液体培养基震荡培养，得到用于转化的浸染液。
（4）利用 法将目的基因导入油菜叶片中，并通过筛选获得转基因油菜细胞，通过 技术可培育成转基因油菜植株。
随着科学技术的发展，人们可以根据人类的需求来改造生物的性状，在许多领域取得了可喜的成果，图中是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解，根据下图回答：
（1）在此过程中涉及的动物细胞工程技术有 、_________________。
（2）在基因工程中，我们称②为____ 。为了使血清白蛋白基因在羊恰当的细胞中表达，基因表达载体中除②片段外，还应该有牛的乳腺蛋白的 ，其是__________识别和结合的位点。
（3）图中①一般经____ ___处理可以得到③，从③到④的过程中一般用未受精的 细胞去核后作为受体，不用普通的体细胞。
（4）要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体是 。
人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_____ ____技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_________。图中早期胚胎可用人工方法从羊输卵管内获得,该过程称为 ; 也可从羊体内取出卵子,通过 后进行早期胚胎培养获得。第5天右以看到胚胎发生收缩，细胞间隙扩大，接着胚胎内部出现裂隙，这是胚胎__ ___期开始的标志。
（3）利用 和胚胎移植技术可获得多个转基因个体。图中早期胚胎通过胚胎移植技术移入代孕母羊子宫内继续发育,暂不移入的胚胎可使用 方法保存。
（4）胚胎干细胞（ES）可由 中分离培养获得的一类细胞。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有__________和__________。
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_____________________。
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即__________DNA连接酶和__________DNA连接酶。
（4）反转录作用的模板是__________，产物是__________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用__________技术。
（5）基因工程中除质粒外，_______________和______________也可作为运载体。
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________。
下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
（1）一个图1所示的质粒分子用限制酶Sma Ⅰ切割时，需断开 个磷酸二酯键。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。
（3）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。
（4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
科学家在某种植物中找到了抗枯萎病的基因，用转基因方法培育了抗枯萎病的金花茶新品种。
（1）将图中“2”连接到“1”上并形成“3”，常用到的酶有____________和____________。
（2）经检测，被图中“3”侵染的金花茶叶片细胞具备了抗病性，这说明“2”已经在金花茶细胞内得到________。该项科技成果在环境保护上的意义是_____________。
（3）将具有抗病基因的金花茶细胞培养成试管苗的过程中，愈伤组织再分化时，除必要的营养供应、激素、适宜的温度和PH值外，还必须给予光照，原因是___________；有的锥形瓶中培养失败还长出很多细菌菌落，其原因是__________。
下面是将乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。
资料1：巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源，同时AOX1基因（醇氧化酶基因）受到诱导而表达，5'AOX1和3'AOXl（TT）是基因AOX1的启动子和终止子，此启动子也能使外源基因高效表达。
资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，下图为科学家改造的pPIC9K质粒，其与目的基因形成的重组质粒在特定部位酶切后形成的重组DNA片段可以整合到酵母菌染色体上，最终实现目的基因的表达。
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上_________限制酶识别序列（SnaB I、Avr II、SacI、Bgl II四种限制酶的识别序列均不相同），这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。
（2）酶切获取HBsA9基因后，需用______________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，根据步骤②可知步骤①将重组质粒先导入大肠杆菌的目的是______________。
（3）步骤3中应选用限制酶______________来切割从大肠杆菌分离的重组质粒从而获得图中所示的重组DNA片段，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
（4）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入______________以便筛选。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入______________以维持其生活，同时诱导HBsA9基因表达。
（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行_______并分泌到细胞外，便于提取。
（7）培育转化酵母细胞所利用的遗传学原理是______________。
【生物--选修3现代生物科技专题】人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的过程是 ，过程⑦的实验技术名称是 。
（2）过程③构建出的表达载体必须要含有 、 、 和目的基因等结构。
（3）过程⑥发生的生理过程是 。
（4）生产药物时可用大肠杆菌做受体细胞，那么④应采用 处理，使受体细胞处于 ，从而将表达载体导入受体细胞；药物生产也可用乳腺生物反应器，那么④则应采用 的方法，从而将表达载体导入受体细胞。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 作疫苗。
（6）实际应用时需要A蛋白具有较好的稳定性。利用蛋白质工程技术对其进行改造时，首先必须了解该蛋白的 ，最终通过改变 ，再通过基因工程得到新的植酸酶。
苏云金杆菌能够形成一种毒性很强的蛋白质晶体，使棉铃虫等害虫瘫痪致死。1993年我国科学家成功培育出抗棉铃虫的转基因抗虫棉，基本流程如图所示。回答下列问题：
（1）苏云金杆菌与棉花在细胞结构方面的统一性体现在哪些方面？ （至少写两方面），培育抗虫棉时的运载体除质粒外，还可以采用____。
（2）培育得到的抗虫棉在产生配子的过程中，两个Bt基因分别移向细胞两极的时期是____。
（3）抗虫棉的推广对环境的保护作用体现在____，但当有科学家提出将Bt基因在粮食、蔬菜作物推广，却遭到强烈反对，最可能的反对理由具体是____。
内皮素（ET）是一种多肽,主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ETA）结合而发挥生物学效应。科研人员通过构建表达载体，实现ETA基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，
图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为
，限制酶XhoⅠ的识别序列为
。请据图分析回答：
（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、dNTP和___________酶等。完成过程①②③的目的是
___________。
（2）过程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使___________键断开，形成的黏性末端是___________。
（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是___________的部位，进而可驱动基因的转录。除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是___________。
（4）过程⑥要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的___________细胞。
（5）将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测___________。
人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：
（1）过程①代表的是____________。
（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和____________两种工具酶。由过程③构建A基因重组载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、_________以及复制原点等。
（3）过程④要检测A基因是否进入受体细胞，常用的方法是________________法；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用________________法。
（4）与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是______________，并能大量制备。
（5）单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的_____________和____________两大技术。
（6）单克隆抗体的制备过程中，两次筛选的目的不同，其中第二次筛选的目的是筛选出______。筛选时所用的培养基是特定的_______________培养基。
（7）举例说出基因工程培育转基因植物的过程中，微生物能起到的重要作用有 、 。
Ⅰ．ch1L基因是蓝细菌（蓝藻）DNA上控制叶绿素合成的基因，为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建并获得缺失ch1L基因的蓝细菌细胞。技术路线如图甲所示，请据图分析回答问题。
（1）与酵母菌相比较，蓝细菌在结构上最主要的特点是_____________，在代谢上最主要的特点是能进行________作用。
（2）①②过程中均使用的工具酶有_________________。
（3）构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是__________和___________。
Ⅱ．人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答下列问题。
（1）制备单克隆抗体过程中要用到________技术和___________技术。
（2）在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的_______________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_______________。
（3）此过程生产的单克隆抗体可以与________特异性结合，从而诊断早孕。
【选修1---生物技术与实践】多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制（如图，图中黑色长方形是引物）。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。
（1）DNA的两条链是反向平行的，当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的________（填“3′”或“5′”）端开始延伸DNA链。
（2）PCR利用了DNA的热变性原理解决了打开DNA双链的问题，但又导致了DNA聚合酶失活的新问题。到20世纪80年代，科学家从一种Taq细菌中分离到________的DNA聚合酶，它的发现和应用解决了上述问题。要将Taq细菌从其他普通的微生物中分离出来，可在________条件下培养进行初步筛选，若要进一步纯化Taq细菌，可用_______________的接种方法。
（3）“PCR”与人体内的DNA复制相比有何特殊之处？（至少答出两点）
（4）若进行3次循环，共需加入引物_____种____个。
（5）某样品DNA分子中共含3000个碱基对，碱基数量满足：
，若经5次循环，至少需要向试管中加入____个腺嘌呤脱氧核苷酸。（不考虑引物所对应的片段）
以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，a-h为操作过程，请据图回答有关问题：
（1）图中c的操作名称是___________，d、f的操作名称是______________。
（2）图中用到的激素是_______________，其目的是获得更多的卵母细胞，其受精后发育可得到早期胚胎；图中早期胚胎属于胚胎发育的__________期，其中胚胎干细胞来源于_______（填数字标号）。
（3）过程h常用的方法是_______________。采用_____________技术来检测转基因牛D的DNA上是否插入了目的基因。
（4）图中牛A、B的性别_____________（填“相同”、“不相同”、“不一定相同”）。
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