下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_▲ 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含_▲ 的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_▲ (填字母代号)。
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是_▲ (填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞整合
（4）过程②采用的生物技术是_▲ 。
（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的_▲ 性。
（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_▲ (填字母代号)技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．抗原－抗体杂交 D．PCR
毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
（1）过程①中最常用的运载工具是_______，所需要的酶是限制酶和____________。
（2）在过程②中，用________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5％CO2的气体环境中，CO2的作用是_________。
（3）在过程③中，用_______处理母羊以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行________处理。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。
毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
（1）过程①中最常用的运载工具是______，所需要的酶是限制酶和_________。
（2）在过程②中，用_______处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5%CO2的气体环境中，CO2的作用是______________。
（3）在过成③中，用_________处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行_________处理。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp Ⅰ、BamH Ⅰ、Mbo Ⅰ、Sma Ⅰ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）若用限制酶Sma Ⅰ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为 。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，产物中共
有 种不同DNA片段。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是 。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加 的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是 。
（每空1分，共12分） 下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）在基因工程中，A表示目的基因，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶是 ；B表示构建的基因表达载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及 等，其中启动子是 酶识别和结合的部位。
（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中②过程常用的方法是 ，使用的绵羊受体细胞为 ，④用到的生物技术主要有动物细胞培养和 。若转基因绵羊可通过分泌的乳汁来生产人类蛋白质，在基因表达载体中，目的基因的首端必须含有 ，这种转基因动物称被为 。
（3）B→D为转基因抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是 ，若使用的棉花受体细胞为体细胞，⑤表示的生物技术是 。要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是 ，以 作为探针。
在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因A控制合成的抗冻蛋白A有较好的应用价值，通过转基因技术获得抗寒能力提高的植株。回答有关问题：
（1）从深海鱼提取和纯化DNA时，选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中 的特性，达到分离目的，加入一定量 可以进一步获得含杂质较少的DNA。
（2）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 黏性末端的限制酶。
（3）为了检测A基因转录的mRNA是否翻译成抗冻蛋白A，需从转基因生物提取 ，用相应的抗体进行 。
（4）若要用动物细胞工程技术，制备抗A抗体的杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入 诱导细胞融合。细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
根据国外统计，白血病约占肿瘤总发病率的3%左右，是儿童和青年中最常见的一种恶性肿瘤。由于基因突变导致白血病患者体内白血病细胞大量增生积聚并浸润其他器官和组织，同时使正常造血受抑制。
（1）科研工作中往往利用患白血病大鼠制备转基因模型，从胚胎工程角度探究治疗白血病。
卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可从已处死的雌鼠________中获取。上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。如果后代大鼠骨髓恢复正常造血功能，说明此转基因动物模型具有治愈白血病的研究价值。
（2）治疗白血病目前采取的较先进治疗措施是基因治疗，基本步骤是：
治疗该白血病的目的基因是指 基因，病毒在此治疗中的作用是 。
（3）目前治疗白血病的最好办法是生物免疫治疗，从患者外周血中采集单核细胞，进行体外培养及诱导，以获取成熟的，具有肿瘤细胞识别能力的DC细胞和杀伤力的CIK细胞。将这两种细胞犹如打点滴一样回输到患者体内，用它们来对肿瘤细胞进行特异性杀伤。选择从患者体内采集细胞而不从其他正常人体内采集的原因是 。
基因工程是在现代生物学、化学和工程学基础上建立和发展起来的，并有赖于微生物学理论和技术的发展运用。基因工程基本操作流程如右图所示，请据图回答：
（1）甲是 ，完成图中剪接过程需要 酶的作用。
（2）在上述过程中，遵循碱基互补原则的步骤有： 。（用图解中字母表示）
（3）不同种生物之间的基因能拼接成功，从分子结构角度分析是因为： ，目的基因在不同的生物细胞中能正确表达，说明了不同生物共用 。
（4）研究发现，番茄体内有一种酶可以抑制害虫的消化功能，现科学家已成功的分离出这种基因并导入到玉米的体细胞中，培育出了具有与番茄相似抗虫性状的玉米植株，在此过程中使用了哪些现代生物科技手段？ ，而玉米这种变异的来源属于 (基因突变,基因重组,染色体变异)。
（5）在培育转基因植物时，我国科学家发明了一种“花粉管通道法”， 就是利用植物受精后花粉萌发形成的花粉管通道，将DNA分子注入胚囊中，此过程相当于基因工程操作中的 步骤。若把目的基因导入该植物的叶绿体DNA中，则其产生的配子中 （填“一定”或“不一定”）含有该基因。
下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白（HAS）的图解，据图回答：
（1）一般情况下，良种奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，请举出一种可以获得更多卵母细胞的方法______________。
（2）基因工程中，在②进入③之前要用限制性核酸内切酶、运载体和DNA连接酶来构建__________，实现②进入③的最常用方法是_________，若②的数量太少，常用________技术来扩增。
（3）过程a是动物早期胚胎的体外培养，培养液中除了含有各种无机盐、有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸、激素等外，还要添加___________。
下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）在基因工程中，A表示 ，B表示 。
（2）如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程和A→B过程共同使用的酶是 ，另外A→B过程还必需用 酶,两者的作用部位是 。
（3）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中④用到的生物技术主要有动物细胞培养和 。
（4）若使用棉花的体细胞为受体细胞，⑤表示的生物技术是 。要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程： 。
下图是利用转基因技术生产干扰素的简化流程。请分析回答：
(1)过程①使用的 酶能使特定部位的两个脱氧核苷酸之间的 （化学键）断开。运载体的黏性末端与目的基因DNA片段的黏性末端就可通过 而结合。 过程②需要用到 酶，
(2图中A的名称是____________，它重组成功的物质基础是__________________ __________的结构组成相同。
(3)A上应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动干扰素基因转录，该部位称为 。为直接检测干扰素基因是否转录，可从细胞中提取 __与用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交，。
（4）利用PCR扩增仪大量扩增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根据这一序列合成 ，除了该物质和目的基因外，扩增仪中还需加入四种脱氧核苷酸和 酶，并适时调整温度，才能使目的基因数量成指数式增长。
（5）在该工程中所用的基因“剪刀”能识别的序列和切点是—G′GATCC—。
请画出质粒被切割形成黏性末端的过程图
基因工程自20世纪70年代兴起后，发展迅猛，成果显著。
Ⅰ利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 _______________________________ 。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为 __________ 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用______________________技术。
Ⅱ近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，下图为PCR原理示意图，据图回答问题。
（1）基因工程中，利用PCR技术来________________，PCR技术依据的原理是DNA的半保留复制，生物体内也能完成DNA的复制，但有所不同，图中A过程称为____________，在生物体内需要______________才能完成。图中B 过程的完成需要_______________________________________等条件。
（2）若DNA样品的长度为100个碱基对，且A占15%，则完成三次循环，共需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸___________个。
油菜是继水稻、玉米、小麦、大豆之后的第五大作物，也是第一大油料作物。生产上主要栽培的是甘蓝型油菜，科学家也越来越重视油菜品种的改良。常用的有以下两种方法：
（1）抗虫基因可以有从 中获取，也可以人工合成；
（2）育种过程Ⅰ涉及的育种方法有 和 ；
（3）⑥步骤的原理是 ，育种过程Ⅱ最大的优点是 ；
（4）转基因作物一般都需要确认目的基因是否单拷贝插入（即目的基因只存在某一条染色体上），请你推测育种过程Ⅰ选择甘蓝型油菜的小孢子作为受体细胞的原因 。
根据下述材料，回答下列问题：
棉铃虫是一种严重危害棉花的害虫。我国科学家发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌 ，它能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死。而此毒蛋白对人畜无害。通过基因工程的方法，我国已将毒蛋白基因移入棉株细胞内并实现成功表达。由于棉铃虫吃了这种转基因棉花的植株后就会死亡，所以该棉花新品种在1998年推广后，已经取得了很好的经济效益。
（1）害虫在喷洒农药进行化学防治后抗药性增强是_________的结果。
（2）毒蛋白对人畜无害，但那使棉铃虫致死，从蛋白质特性看，蛋白质具有_______________性。
（3）“转基因抗虫棉”抵抗害虫的遗传信息表达过程可以表示为_________。
（4）“转基因抗虫棉”的抗虫变异，属于可遗传变异类型中的 _________。
（5）该项成果在环境保护上的作用是__________________________。
（6）科学家预言，该棉花独立种植若干代后，也将出现不抗虫的植株，此现象来源于_____________________。
（7）题中“毒蛋白基因移入棉株细胞内并实现成功表达”中的“成功表达”含义是指____________________。
（8）与杂交育种、诱变育种相比，基因工程培育新品种的主要优点是_________________________。
（9）在该工程操作中，所用基因的“剪刀”是___________________,基因的“针线”是______________，基因的“运载工具”是_________________。
请回答有关下图的问题：
(1)图甲中①～⑤所示的生物工程为__________。该工程是指以__________________________作为基础，通过__________修饰或基因合成，对现有__________进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。
(2)图甲中序号④所示过程叫做__________，该过程遵循的碱基互补配对原则不同于翻译过程的是__________(请将模板碱基写在前)。
(3)如图乙，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，在基因尾端还必须有[2]__________；
(4)若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，则构建基因表达载体时，图乙中序号[1]代表的是__________________________；且在图甲中⑨过程之前，要对精子进行筛选，保留含性染色体__________的精子。
粤公网安备 44130202000953号
