(8分，除特别说明外每空1分)
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图。请回答：
（1）过程①代表的是 。
（2）过程②构建A基因表过载体时，必须使用___ 和 两种工具酶。
（3）过程③采用的实验技术是 ，获得的X是 。
（4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行 比较，或用图中的 进行特异性结合检测。
如图是将人的生长激素基因导入细菌D细胞内，产生“工程菌”示意图。所用的运载体为质粒A，生长素合成基因为B，a为目的基因于质粒A的结合部位。（已知细菌D细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌后，基因能得到表达）
（1）图中A和B产生的C叫__________，它通过在体外完成，此过程必须用到的工具酶为DNA限制性核酸内切酶和__________。除了细菌以外，理论上能够接纳C的受体细胞还可以是__________。
（2）若质粒A模板链中的AGT序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是________。一般而言，一个核糖体最多可同时容纳________分子的tRNA。
（3）限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的识别序列及切割位点分别是—C↓AATTG—和—G↓AATTC—。下图表示四种质粒和目的基因，其中，箭头所指部位为限制酶的识别位点，质粒的阴影部分表示标记基因。不适合作为图示目的基因载体的质粒是[ ]（多选）。
（4）下列四幅图中能正确反映目的基因转录产物内部结构的是___________。
TSS：转录起始位点，TTS：转录终止位点，STC：起始密码子，SPC：终止密码子
人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用___________________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用__________________技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其______________。采集的精子需要经过____________，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。
【生物--选修3 现代生物科技专题】
（1）iPS细胞是利用逆转录病毒将Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc 等四个基因转入分化的体细胞中诱导其成为类似胚胎干细胞的一种细胞。将四个目的基因导入体细胞之前，通过_______技术进行迅速扩增，然后再与逆转录病毒结合导入体细胞，逆转录病毒所起的作用是_________________________。
（2）利用iPS细胞技术可以治疗白血病等顽症。将患者的体细胞诱导成为iPS细胞后进行基因改造，再定向诱导其分化成为造血干细胞后输入患者体内，可达到治愈疾病的目的。其优点是既解决了移植器官短缺问题，又不存在_________和伦理争议。
（3）我国科学家运用基因工程技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达培育出了抗虫棉。转基因作物的种植使害虫得到有效控制，减少了农药的使用量，保护了生态环境。与此同时，人们对转基因生物的安全性提出了质疑，主要体现在生物安全、___________和___________等方面。
（4）桑基鱼塘生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成无废弃物农业，这主要遵循了生态工程的___________原理。同时，通过饲养家禽、家畜，栽培食用菌，提高农民经济收入，使保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的______________________原理。我国西北一些地区年降雨量少，适宜种植灌木和草，却被硬性规定种植属于乔木的杨树，致使许多地方的杨树长成半死不活状，结果防护林成为残败的“灰色长城”。其失败的原因主要是违背了_____________________原理。
（5）粗提取DNA时，利用不同浓度的NaCl溶液反复溶解DNA的目的是_______________，利用冷酒精处理滤液的目的是__________和__________。
萤火虫发光是体内荧光素酶催化一系列反应所产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来荧光素酶的惟一来源是从萤火虫腹部提取。但加利福尼亚大学的一组科学家成功地通过转基因工程实现了将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内产生荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：
(1)在此转基因工程中，目的基因是____ ____，具体操作过程中下图所示的黏性末端是由________种限制性核酸内切酶作用产生的。
(2)在上述过程中需要多种酶的参与，其中包括限制性核酸内切酶和_ ____等。
(3)将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要载体的帮助。下列_____ (多选)是选取载体时必须考虑的。
A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存 B．具有特定的限制酶切割位点
C．具有与目的基因相同的碱基片段 D．具有某些标记基因
(4)本实验中将目的基因导入大肠杆菌的载体可以是________(多选)。
A．质粒 B．动物病毒 C．噬菌体的衍生物 D．植物病毒
(5)在此转基因工程中，将体外重组DNA导入大肠杆菌体内，并使其在细胞内稳定保存和表达的过程称为转化。最常用的方法是首先用________处理大肠杆菌，目的是________________。
(6)转基因生物的DNA上是否插入目的基因，用_____ ___技术来检测；目的基因是否表达出相应的蛋白质，除了通过大肠杆菌是否发光来确定外，还可以通过_____ ___技术来判断。
(8分)人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
(1)htPA基因与载体用________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____________技术。
(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其________。采集的精子需要经过________，才具备受精能力。
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的________。
(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。
多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。成熟的番茄果实中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，不利于保鲜。利用基因工程减少PG基因的表达，可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入番茄细胞中，得到转基因番茄，具体操作流程如下图。据图回答下列问题：
⑴若已获取PG的mRNA，可通过 获取PG基因。
(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有________的培养基进行筛选，理由是______________。之后，还需将其置于质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞________现象来鉴别细胞壁是否再生。
(3)由于导入的目的基因能转录出反义RNA，且能与________互补结合，因此可抑制PG基因的正常表达。若________，则可确定转基因番茄培育成功。
(4)将转入反向链接PG基因的番茄细胞培育成完整的植株，需要用________技术；其中，愈伤组织经________形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加____________________。
(5)将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是__________，单株鲜重的变化趋势是________________________。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量______(能、不能)满足自身最佳生长的需要。
(6)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应________(降低，增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。
菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答：
（注：卡那霉素抗性基因（kanR）作为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）
（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是 _ _，此外还可用 作为运载体。
（2）如图限制酶M和N切割产生的黏性末端是 __，连接它们所需要的基本工具是__ __。
（3）为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒，可用__ _处理，使其处于感受态。
（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及__ __和 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。
（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了 __次。
（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2 龄幼虫，实验结果如下表所示。请据表回答：
①对照组应饲喂等量的 。
②据表分析，__ 差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。
为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
(1)如图甲，获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于上图中的(填“a”或“b”)处，DNA连接酶作用于 (填“a”或“b”)处。
(2)将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和 法。
(3)由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用 技术，该技术的核心是 和 。
(4)为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
（5）如图乙是该耐盐基因表达过程中的一个阶段，图中3和4的核苷酸相同否？说明理由 。
[生物——选修3：现代生物科技专题]
应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：
(1)在培育转人生长激素基因牛过程中，②过程常用的方法是 ，采用 技术可以获得多头基因型相同的转基因牛。
(2)转人生长激素基因牛可通过乳腺细胞分泌乳汁来生产人生长激素，在构建基因表达载体时，人生长激素基因的首端必须含有 。
(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅲ代表的细胞具有 的特点。
(4)在抗虫棉培育过程中，④过程常采用的方法是 ；⑤过程采用的技术是 ；在分子水平上可采用 方法来检测转基因抗虫棉的抗虫基因是否成功表达。
(5)下面是获取目的基因的几种方法，其中需要模板的是_______。
① 从基因组文库中获取目的基因 ② 利用PCR技术扩增目的基因
③ 构建cDNA文库 ④ 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成目的基因
| A．①② | B．②③ | C．①③ | D．①④ |
(6)当获能后的精子与卵子相遇时，首先发生 ，释放出有关的酶直接溶解卵丘细胞间的物质，形成精子穿越放射冠的通路。防止多精入卵的生理反应依次有透明带反应、 。
干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取0.5μg，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素。试分析原理和优点。
（1）从人的淋巴细胞中取出干扰素基因，一般可采用_______________技术进行扩增，此基因在基因工程中称为___________________。
（2）此基因与细菌的质粒在重组过程中需先用________________酶和_______________酶进行处理，使其形成__________质粒，然后将目的基因移植到酵母菌体内。
（3）为了明确干扰素基因在酵母菌体内能否发挥功能作用，从分子水平看，首先要检测其是否__________________，而要看本转基因实验是否成功的标准是能否表达出____________。
（4）人的干扰素基因能在酵母菌中进行表达的原因是人和酵母菌_______________________。
（5）科学家在培养转基因植物时，常用土壤农杆菌中的质粒做运载体。质粒是基因工程最常用的运载体，它具备运载体的条件:①能够在宿主细胞中_______并稳定地保存；②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；③具有某些_________________，便于进行筛选。
肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图一请回答有关问题。
⑴进行过程①时，需用________酶切开载体并用_____________酶连接以插入let7基因。
（2）重组载体的基本组成成分包括_________ ________ ________ _________
(3)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。
(4)研究发现，let7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图二。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_____含量减少引起的。
请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：
Ⅰ、（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、 、 以及在母体中发育和产出等过程。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其 。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和 。
（3）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤中的核心步骤是 。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，将该基因表达载体导入受体细胞所常采用的方法是显微注射法，而培育转基因植物采用的导入方法有农杆菌转化法花粉管通道法和 ，为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是 （受精卵、乳腺细胞）。
Ⅱ、下图是对牛胚胎所作的技术处理，请据图分析回答：
（1）图中所示牛的胚胎发育处于 时期。其中B、D代表的结构名称分别是：B ； D 。
（2）甲过程采用机械方法进行的胚胎分割技术，该技术在实践中的主要应用意义是 ；乙过程取滋养层可用于
因为猪的基因和人类的基因存在一定相似度。据报道经过特殊处理的猪皮可在人身上存活3周左右，起到保护创面免受感染的作用。为了使移植的猪皮存活时间更长，有人设法导入人的相关基因(用P表示)，获得转基因小白猪。其简单流程如图所示：
(1)过程①中形成重组DNA常用的酶有____；将目的基因导入成纤维细胞常用的方法是_____。
(2)过程②中，常用________酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养成纤维细胞时需要满足的条件是无菌、无毒的环境、________、温度和pH、________。
(3)过程③中所用的胚胎工程技术是______________，然后将早期胚胎移入另一头与供体__________但未经配种的代孕母猪的相应部位。
(4)图中的卵母细胞应在体外培养到__________期。
2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书。下图表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：
（1）④过程应用的主要生物技术是 。
（2）杀虫基因（crylA）是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于 工程技术范畴。
（3）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），据图分析：
①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入____________。
②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的 和 （基因），保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于___________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。
③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是 。
（4）若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为
，则该酶识别的核苷酸序列是 。
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