以下为人工合成reAnti基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答
(1)人工合成的reAnti基因可通过________ _________技术手段体外迅速扩增。
(2)过程③要将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的方法是 ，重组质粒导入之后，可通过 技术，来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。
(3)从猪中取胎儿成纤维细胞，用 处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含 （要求写清楚每种气体所占比例）的混合气体培养箱中进行培养，培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加 。
(4)去核前的卵母细胞应培养到 期。其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚胎。
下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。
资料1 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，同时AOX1基因也会因受到诱导而表达[5’AOX1和3’AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。
资料2 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。
(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上________、_______限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。
(2)酶切获取HBsAg基因后，需用________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取________________。
(3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。
(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用__________________方法进行检测。
(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入________以维持其生活，同时诱导HBsAg基因表达。
(6)与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行________并分泌到细胞外，便于提取。
科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，请据图回答：
(1)过程①所需要的酶是________。
(2)在构建基因表达载体的过程中，应用限制酶______切割质粒，用限制酶______切割目的基因。用限制酶切割目的基因和载体后形成的黏性末端通过__________________原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是
________________________________________________________________________。
(3)在过程③中一般将受体大肠杆菌用________________进行处理，以增大____________的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。
(4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果(圆点表示菌落)，该结果说明能够生长的大肠杆菌中已导入了____________________，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b所示的结果(圆圈表示与图a中培养基上对照无菌落的位置)。与图b圆圈相对应的图a中的菌落表现型是__________________________，这些大肠杆菌中导入了________________。
(5)人体的生长激素基因能在大肠杆菌体内成功表达是因为______________________。目的基因导入大肠杆菌中后表达的过程是______________________________________。
降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。
在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：
(1)Klenow酶是一种________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点—G↓AATTC—)和BamHⅠ(识别序列和切割位点—G↓GATCC—)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________。
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是_______________________________________________________________________________
_____________________________________________________。
③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有________。
(3)经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是
______________________________________________________
______________________________________________________。
(4)上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是________。
肥厚型心肌病属于常染色体显性遗传病，以心肌细胞蛋白质合成的增加和细胞体积的增大为主要特征，受多个基因的影响。研究发现，基因型不同，临床表现不同。下表是3种致病基因、基因位置和临床表现。请作答。
| 基因 |
基因所在染色体 |
控制合成的蛋白质 |
临床表现 |
| A |
第14号 |
β-肌球蛋白重链 |
轻度至重度，发病早 |
| B |
第11号 |
肌球蛋白结合蛋白 |
轻度至重度，发病晚 |
| C |
第1号 |
肌钙蛋白T2 |
轻度肥厚，易猝死 |
（1）基因型为AaBbcc和AabbCc的夫妇所生育的后代，出现的临床表现至少有_______种。
（2）β-肌球蛋白重链基因突变可发生在该基因的不同部位，体现了基因突变的________。基因突变可引起心肌蛋白结构改变而使人体出现不同的临床表现，说明上述致病基因对性状控制的方式是_________________________。
（3）已知A基因含23000个碱基对，其中一条单链A:C:T:G=1:2:3:4。用PCR扩增时，该基因连续复制3次至少需要_____________个游离的鸟嘌呤脱氧核苷酸。
（4）如果用导入正常基因方法治疗肥厚型心肌病能达到治疗目的吗？___________。为什么？____________________。
（5）基因治疗需应用转基因技术，其核心步骤是_____________________，所需的工具酶是_______________________。
下列甲、乙两图为获得生物新品种的过程示意图。请据图回答
（1）检测目的基因是否转录出mRNA的具体方法是使用 与提取出的 做分子杂交。
（2）在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kanR）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。乙图为获得抗虫棉技术的流程。A过程需要的酶有 。图中将目的基因导入植物受体细胞采用的方法是 。C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入 。
（3）随着科技发展，获取目的基因的方法也越来越多，若乙图中的“抗虫基因”是利用甲图中的方法获取的，该方法称为 。图中①过程与细胞中DNA复制过程相比，该过程不需要 酶。③是在 （填“酶的名称”）作用下进行延伸的。
（4）离体棉花叶片组织经C、D、E成功地培育出了转基因抗虫植株，此过程涉及的细胞工程技术是 ，该技术的原理是 。
请回答基因工程方面的有关问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 。
②在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的一组引物（只标注了部分碱基序列）不合理（如下图），请说明理由。
；
(3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的 功能，这是因为 。
登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热、出血甚至休克。科学家用以下方法控制病毒的传播。
（1）将S基因转入蚊子体内，使蚊子的唾液腺细胞大量表达S蛋白，该蛋白可以抑制登革热病毒的复制。为了获得转基因蚊子，需要将携带S基因的载体导入蚊子的
细胞。如果转基因成功，在转基因蚊子体内可检测出 、 和 。
（2）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB）。A、B基因位于非同源染色体上，只有A或B基因的胚胎致死。若纯合的雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1群体中A基因频率是 ，F2群体中A基因频率是 。
（3）将S基因分别插入到A、B基因的紧邻位置（如图11），将该纯合的转基因雄蚊释放到野生群体中，群体中蚊子体内病毒的平均数目会逐代 ，原因是 。
干扰素能抵抗所有病毒引起的感染，对治疗癌症及白血病也有一定疗效。传统的干扰素生产方法是从人的淋巴细胞中提取，每升人的血液只能提取0.05 μg干扰素。而科学家通过基因工程方法可以在酵母细胞内获得大量的干扰素(如下图所示)。请据图回答有关问题：
(1)可以获得目的基因的方法有_______________________________________________。
(2)通过基因工程可以把人的干扰素基因插入到酵母菌的基因中，其原因是_______________________________________________________________________。
(3)图中X的名称是______，它的组成除了目的基因外，还必须有________。
(4)要实现c过程，通常要对酶母菌细胞用_______进行处理。要检测干扰素基因是否成功导入到酵母菌细胞，所用到的方法是_________。要检测基因是否成功表达，除了进行分子检测之外，有时还需要进行___________的鉴定。
10.科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达但在进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—GATC—，据图回答：
（1）过程①表示的是采取 的方法来获取目的基因。
（2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶 切割质粒，用限制酶 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过
原则进行连接。
（3）人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是 。
（4）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为 。写出目的基因在细菌中表达的过程 。
（5）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的说明已导入了 ，反之则没有导入。
利用疫苗对人体进行主动免疫是预防传染性疾病最有效的手段之一，在与传染病作斗争的过程中，人们已经研制出了数百种疫苗。如下图所示为口蹄疫疫苗的生产过程示意图，请据图回答：
（1）用于预防接种的疫苗，在免疫学中属于 ，图中可看出口蹄疫疫苗的化学本质是 。
（2）图中获取目的基因的方法是 ，步骤③和④要用到的工具酶分别是
和 。若质粒和目的基因被同种酶切割，质粒得到的分子末端序列为AGCTA—
T—，
则能与该质粒连接的目的基因分子末端序列为 。
（3）在口蹄疫苗生产过程中，将重组质粒导入大肠杆菌时，要将大肠杆菌用氯化钙处理，目的是 。
（4）大肠杆菌作为工程菌投入生产前，应检测重组质粒是否导入。若该质粒上带有抗青霉素基因，而所用大肠杆菌不带有任何抗生素性基因，则该抗青霉素基因在基因工程中可作为检测的 ，如果重组质粒已经顺利导入大肠杆菌，则大肠杆菌在含有青霉素的培养基上 （答能够或不能）生长。若目的基因导入后没有表达，则还应该对目的基因的 进行装饰。
人的血清白蛋白（HAS）在临床上需求量很大，通常从血液中提取。但由于艾滋病病毒等的威胁与日俱增，使人们对血液制品的使用顾虑重重。如果应用现代生物科学技术，将人的血清白蛋白基因导人奶牛细胞中，那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就会安全、高效地满足人类需求。下图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，根据下图回答：
（1）以上过程涉及的现代生物技术中，属于细胞工程的有 。
（2）在基因工程中，我们称①为目的基因，请你举出获取目的基因的主要方法：
（至少答两种）。在①进入③之前要
构建基因表达载体，这是基因工程的核心，除目的基因外，基因表达载体还必须含有 ，将①导人③的常用方法是 。
（3）图中②一般经过 处理可以得到③，从③到④的过程中一般利用未受精的卵母细胞去核后作为受体细胞，对卵母细胞的去核处理一般选择在
时期进行。
（4）将⑤送人⑦的最佳时期是 期。
（5）在胚胎发育过程中，囊胚进一步扩大，会导致 破裂，胚胎从中伸展出来，这一过程叫做 。
红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图
（1）图中①所指的是 技术。
（2）图中②所指的物质是 ，③所指的物质是 。
（3）培养重组CHO 细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应定期更换 。
（4）检测 rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆抗体。分泌单克隆抗体的 细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。
（5）动物体内能产生特异性抗体的细胞称为____ 。在抗体，溶菌酶、淋巴因子和编码抗体的基因这四种物质中不属于免疫活性物质是_____。在吞噬细胞、淋巴细胞和红细胞这三类细胞中不属于免疫细胞的____。
Ⅰ．我国科学工作者经研究发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而此毒蛋白对人畜无害。通过科技攻关，我国科学工作者已成功地将该毒蛋白基因导入棉花植株体内并实现了表达。由于棉铃虫吃了新品种“转基因抗虫棉”植株后就会死亡，所以该棉花新品种在近年推广后，已收到了很好的经济效益，请据以上所给材料回答下列问题：在培育抗虫棉新品种过程中，所用的基因的“剪刀”是__________，基因的“运输工具”是________。我国科学工作者采用了独创的花粉管通道法，将毒蛋白基因导入棉花的体细胞，再利用___________技术获得“转基因抗虫棉”植株。
Ⅱ．如图所示为人类“治疗性克隆”的大概过程，请据图作答。
（1）人类“治疗性克隆”属于生物工程中的__________________工程。“治疗性克隆”的结果说明高度分化的体细胞的核仍然具有___________。
（2）相同的胚胎干细胞，“克隆”的结果各种各样，如有的是胰岛细胞，有的是血细胞，有的是心肌细胞，究其根本原因是基因__ _______的结果，而直接原因则是 不同。上述“克隆”过程是建立在胚胎干细胞的___________和__________的基础上的。
（3）按上述方法克隆的器官在移植方面的主要优点是_____ __________。这与细胞膜表面的 有关。
右下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。据图回答下列问题：
⑴将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有______种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。
⑵用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是____________________；
⑶在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。
⑷基因工程是一柄“双刃剑”，一方面可以极大地提高栽培作物的基因潜力，打破了种间的______隔离，从变异的角度看，基因工程的原理是_____________；另一方面也可能给生态系统和人类带来安全隐患，举一例简要说明：_______________________。
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