药物HT(三尖杉酯碱)是癌症化学治疗的药物之一，临床上，药物的使用剂量对治疗非常重要，剂量过少时对癌细胞的杀伤作用不显著，治疗效果不好；剂量过大时则会对患者自身正常细胞造成巨大的伤害。请根据所给的实验材料完成相应的实验。
实验材料：人肺细胞悬液、人肺癌细胞悬液、生理盐水配制的0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、25mg/L的HT溶液、生理盐水、血球计数板。请回答：
（1）实验目的：
（2）实验思路：
①取培养瓶若干个，分组如下：
②将各组样品在培养一段合适的时间后，各组取样，在显微镜下
（3）实验结果记录：请设计一张表格用于记录结果
科学家发现家蝇体内存在一种抗肿瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重视。临床使用发现此蛋白质对肿瘤确良好的疗效，可以通过基因工程技术导入大肠杆菌内进行大量生产。其过程大体如图所示：
（1）在基因工程中，获取目的基因的方法有 （至少写出两种）。
（2）图中a过程叫 ，它是基因操作的核心步骤。
（3）将抗肿瘤基因导入大肠杆菌，并在大肠杆菌细胞内成功表达产生了抗肿瘤蛋白，由于 ，因此在短时间内就能获得大量的抗肿瘤蛋白。
（4）细胞工程可以作为辅助手段，通过获得特定的单克隆抗体并 与抗肿瘤蛋白结合制成“生物导弹”，以实现“靶向杀癌”。下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：
① 图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是 细胞，要获得能产生抗肿瘤蛋白抗体的杂交瘤细胞至少要经过 次筛选。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是 。
② 实验室无法单独培养能获得单克隆抗体的细胞。通过细胞工程获得的杂交瘤细胞由于具备 的优点，使单抗技术获得成功。
人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG 单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG 单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
（1）制备单克隆抗体过程中要用到____________和____________技术。
（2）制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG 相当于__________，使小鼠产生分泌相应__________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的__________免疫。
（3）在B 淋巴细胞内DNA 合成有D 和S 两条途径，其中D 途径能被氨基嘌呤所阻断。而骨髓瘤细胞的DNA 合成没有S 途径。
①利用DNA 合成途径不同的特点配制的HAT 培养基含有多种成分，其中添加的__________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。(2分)
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是________________________。(2分)
（4）此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合，从而诊断早孕。(2分)
[生物—选修3：现代生物科技专题]胚胎工程和基因工程目前在生物技术中发展较快，回答下列问题：
(1)在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行________处理。另外，培养的卵母细胞需要发育至___________，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。
(2)利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植的原因是__________________________________________________________。
(3)若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、_________、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的_____(填“受精卵”或“乳腺细胞”)，导入方法是____________________。
2012年我国科学家首次培育成功携带（Leqtin）蛋白的转基因克隆猪，下图为获得瘦素（Leqtin）蛋白转基因克隆猪的技术流程。请回答
（1）瘦素蛋白基因表达载体应有___________________识别和结合的位点，以驱动瘦素蛋白基因的转录。
（2）过程常用的方法是___________________。进行细胞培养过程中通常在培养液中添加___________________以防止培养过程中的污染。
（3）过程使用的成熟卵母细胞是处于___________________期的卵母细胞。
（4）重组胚胎能在受体猪子宫内存活并最终成功产下转基因克隆猪，说明受体猪对转入其子宫的外来胚胎基本上不发生___________________反应。
下图为人类对克隆羊技术的拓展图和应用。请据图回答问题。
（1）图中所涉及的现代生物技术有 等（至少写三个）。
（2）下列有关胚胎移植的叙述错误的是（ ）
| A．胚胎收集中冲卵指的是从子宫中冲出胚胎，而非冲出卵子 |
| B．只有供、受体生理状态相同，移入受体的胚胎才能被接受 |
| C．供体和受体要进行免疫检查，防止发生免疫排斥反应 |
| D．不同动物其胚胎移植的时间不同 |
（3）图中两个婴儿长大后，外貌、性格和其他特征与原型男人基本相同，这说明 具有全能性。
（4）使用培养基进行胚胎干细胞培养时，通常要加入 等天然成分，除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中，还需要保证细胞生活所需的 和 。
（5）图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中，必须用 处理内细胞团，使之分散成单个细胞。干细胞形成组织、器官必须要进行 。
【生物——选修3：现代生物科技专题】在治疗人类某些疾病时，人的体细胞核移植技术得到的胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织器官后，可用于组织器官的移植，操作流程如图所示。请回答：
(1)进行图中过程①时，需将体内取出的卵母细胞在体外培养至 期，该期卵母细胞核的位置靠近 ，可用微型吸管将之与细胞核一并吸出。
(2)图中过程②表示将用物理或化学方法激活重组细胞，使其在发育培养液中完成 ，最终形成囊胚的过程。
(3)图中过程③④表示从囊胚中取出 细胞，将其培养在 细胞上，形成大量胚胎干细胞的过程。胚胎干胞在形态上的特性表现为 。
(4)图中过程⑤表示在培养液中加入 ，就可以诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化，用于患者的组织器官移植。
细胞工程根据操作对象的不同，可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。近年来，细胞工程领域成果迭出，方兴未艾。请回答以下问题：
（1）应用植物组织培养技术，可以实现植物种苗短时间内大量繁殖。植物组织培养技术所利用的生物学原理是____________________。利用植物组织培养技术培育无病毒植株，选材时一般选取____________________。
（2）应用植物体细胞杂交技术，能够培育出靠杂交育种无法得到的作物新品种。在进行植物体细胞杂交之前，必需先用______________酶去除细胞壁，获得有活力的原生质体。进行原生质体融合时常用的化学促融剂是_____________。
（3）应用动物细胞培养技术可以大量培养各种抗病疫苗。在进行动物细胞培养之前，需先用________________酶处理组织切块，使其分散成单个细胞。进行动物细胞培养时，所需气体主要有__________________。
（4）应用杂交瘤细胞技术能为人类提供诊治肿瘤的单克隆抗体。制备单克隆抗体过程中，经选择培养得到的杂交瘤细胞还需进行_____________和_______________，经多次筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。与常规的抗体相比，单克隆抗体具有的显著的特点是________________________；单克隆抗体通常与抗癌药物结合在一起构成__________________，用于癌症的治疗。
研究人员为了制备烟草（四倍体,4n=48）的叶片细胞与紫罗兰（二倍体，2n=14）的紫色花瓣细胞的原生质体，并诱导其融合形成紫罗兰烟草植株，进行了如下实验：
一、原生质体的制备
酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。蜗牛酶液从蜗牛（以植物为食）消化腺中提取；果胶酶、纤维素酶从微生物中提取。为了研究不同酶液的酶解效果，某实验小组取无菌烟草幼叶，切成相同大小的小片，等量放入6支试管中，试剂用量和实验结果列于下表。请回答有关问题。
| 试管编号 项目 |
Ⅰ |
Ⅱ |
Ⅲ |
Ⅳ |
V |
Ⅵ |
| 蒸馏水（mL） |
2 |
0 |
1 |
1 |
1 |
1 |
| 缓冲液（mL） |
0 |
2 |
1 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
| 果胶酶液（mL） |
0 |
0 |
0 |
0.5 |
0 |
0 |
| 蜗牛酶液（mL） |
0 |
0 |
0 |
0 |
0.5 |
0 |
| 纤维素酶液（mL） |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0.5 |
| 实验结果（绿色深浅程度） |
— |
— |
— |
+ + + |
+ + + + |
+ + |
（注：“+”越多表示绿色越深，“—”表示颜色无显著变化）
（1）实验过程中，需要轻摇试管，其目的是 ，使原生质体从叶小片中游离出来，以便观察悬浮液绿色的深浅。
（2）从绿色的深浅可推测：蜗牛酶液酶解效果最好，原因是蜗牛酶液含有
等多种酶。该实验中 是空白对照组，其设置意义是 。
（3）如果对制取的烟草叶肉细胞原生质体是否还有活性进行检验，其检验的方法可以是 。
二、用同样方法制取紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液
三、原生质体融合
将等量的紫罗兰花瓣细胞原生质体悬浮液与烟草叶肉细胞原生质体悬浮液加入到装有20%的PEG溶液的离心管中混合后，离心10min，将分离得到的融合成团的原生质体悬浮液与含有琼脂的液体培养基混合均匀后，凝固形成很薄的平板。再利用有关显微镜观察、鉴定融合的原生质体。请分析：
（4）步骤三中，若所有的原生质体均两两融合，则所得到的某一个融合的原生质体中含有的染色体数可能是 。
（5）只利用显微镜观察，不借助其他手段
（能，不能）鉴别出杂种融合的原生质体，你所依据的观察现象是 。
四、制取紫罗兰烟草的人工种子
（6）如右图2中，包埋形成人工种子过程中，先适当加热使海藻酸钠溶化，然后将溶化的海藻酸钠溶液 ，再加入 充分搅拌混合均匀。
若将得到的人工种子播种后成长为成紫罗兰烟草植株，杂种植株为 倍体。
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的过程是 。过程②代表的过程是
（2）过程③构建A基因重组载体时，必须使用 、 两种工具酶。
（3）过程⑥发生的生理过程是 、
（4）过程⑦的实验技术名称是 ，过程⑦依据的原理是 。需用 促进X的形成。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒 进行比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示信息回答下列问题。
（1）试管牛的培育属于 （“有性繁殖”或“无性繁殖”）；试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的工程技术有早期胚胎培养、_________等；克隆牛的培育依据的原理是 。
（2）促使B牛多排卵的激素一般是 。对B牛和D牛要进行 处理。
（3）在受精的过程中，判断卵子是否受精的标志是 。
（4）要培育高产奶率的转基因牛，如建立生产生长激素的乳腺生物反应器，即科学家将 和乳腺蛋白基因的 、 等调控组件重组在一起，该过程需要用到的酶是 ，再通过 法导入牛的 中。
回答下列有关生物工程技术问题。
（1）在植物基因工程中，构建重组Ti质粒时，通常要用 分别切割
和 ，再用 进行连接。
（2）体内受精作用进行时防止多精入卵的机制有 和 。
（3）动物细胞体外培养时，要保证被培养的细胞处于 的环境，在营养方面通常需要在培养基中加入 等天然成分。细胞培养需在适宜的理化条件下进行，此外还需要一定的气体环境，其中C02的主要作用是 。
紫草药膏是一种治疗烧伤的特效药，其有效成分主要是紫草素。研究发现紫草素和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。请回答：
（1）配制诱导愈伤组织的固体培养基，分装后要进行 。接种前，要对紫草根进行 。
（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或 接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是 。实验前需对超净工作台进行 处理。
（3）可用金黄色葡萄球菌来检验抑菌特性。抑菌实验所用培养基中的牛乳膏和蛋白胨主要为细菌生长提供 。抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的 来比较紫草素和乳酸素的抑菌效果。实验结束后，对使用过的培养基应进行 处理。
（4）紫草素易溶于水溶性（亲水性）有机溶剂，从培养物干粉中提取紫草素宜选用 方法，操作时应采用 加热。
下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答：
（1）②所示的生物技术名称是 ，该项技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为 。重组细胞A培养过程中所用培养液除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分以及 等物质，并且用一定的方法激活其完成细胞分裂和发育进程。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有 的物质。
（2）图中③所示的结构名称是 。其在形态上，表现为体积小，细胞核 ，核仁明显；在功能上具有 。若实现重组细胞B定向诱导分化，需要在培养基中加入 。
（3）④所示的生物技术名称是 ，若想得到大量健康的胰岛B细胞基因，可利用 技术，该技术利用的工具酶是 。
（4）图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是 。该种基因治疗所属类型为 。
[生物——选修3:现代生物科技专题]
研究表明,某种原癌基因表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长,目前已成为乳腺癌有效的生物治疗手段。如图为抗H蛋白单克隆抗体的制备及相关操作过程,请回答问题:
(1)将H蛋白注射到小鼠体内,取该小鼠的脾脏细胞与甲培养皿中骨髓瘤细胞进行融合,则乙培养皿中融合细胞类型有____种,其融合的原理是________。其中将H蛋白注射到小鼠体内时,在小鼠体内发了 免疫过程。
(2)图中③过程,将融合细胞置于___________培养基中培养,一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到丙(多孔培养板)上培养,吸取生长有克隆细胞的培养孔中的上清液,应用___________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选,就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
(3)治疗乳腺癌时,可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”,杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体____________________的特点。筛选得到的杂交瘤细胞,经过②过程(小鼠腹腔内培养)或④过程(体外培养)可以获取大量的单克隆抗体,由上述过程产生的单克隆抗体不能直接用于人体,理由是_______________________________。
(4)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因,该基因能激发动物细胞分裂,这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体的技术外,请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路:____________________。
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