2009年，H1N1病毒肆虐全球，使数以亿计的人患上了甲型H1N1流感，我国政府和科研人员通力合作，很快便研制生产出了甲型H1N1流感疫苗，并且为广大师生免费接种了疫苗。甲型H1N 1流感病毒和以往的流感病毒一样为RNA病毒。请据此流程图回答下列问题：
（1）流程图中涉及到的生物工程技术有[①]基因的剪切拼接技术、[ ]________、[ ]________。
（2）在将抗原决定基因注入奶牛受精卵前，须先将其进行人工改造，也就是给其接上_______和______，否则它不能表达；然后再与运载体结合，才能进行显微注射。
（3）为获得产奶的奶牛，在进行③过程前，要对胚胎进行________,此项技术通常要选用囊胚期的 细胞。
（4）如对扩增出的DNA进行鉴定，可采用的试剂是 ，在沸水浴条件下出现 颜色反应，则为DNA。
下图为人类对克隆羊技术的拓展及应用的设想。请据图回答问题：
（1）图中所涉及的现代生物技术有 等（至少写三个）。
（2）若利用图中过程最终获得婴儿说明 具有全能性，两个婴儿性状与 基本相同。
（3）使用培养基进行重组细胞培养时，通常要加入 等天然成分，为防止培养过程中杂菌污染，通常要在细胞培养液中添加一定量的 。培养过程中通常采用 ，将其置于含 的混合气体的培养箱中进行培养。
（4）图中从“内细胞团到胚胎干细胞”的培养过程中，必须用 处理内细胞团，使之分散成单个细胞。
如图表示番茄植株（HhRr）作为实验材料培育新品种的途径。请据图分析回答下列问题：
（1）通过途径2、3获得幼苗的过程都应用了植物组织培养技术，该技术依据的生物学原理是 。
（2）通过途径3、4培育品种C、D所依据的遗传学原理分别是 。
（3）要尽快获得稳定遗传
的优良品种应采用途径 ，该过程中秋水仙素的作用机理是 。
（4）品种B与途径3中由叶肉细胞培养的幼苗基因型相同的概率为 。
传统药用植物栝楼的根、果、种子等均能入药，其合成的天花粉蛋白是中药天花粉的主要有效成分。现科研人员进行以下的研究，大致流程如下：
（1）接种在MS培养基中的栝楼种子，如先经加水浸没的萌发率为75%，不加水浸没的萌发率为2.5%，说明栝楼种子萌发需要 。
（2）在培育“无菌苗”过程中，使用的部分激素组合如表1（注：—表示未添加该种植物激素），除甲组仅有顶芽长成小苗外，所有的培养基上都有腋芽长出，可见诱导腋芽生长加入 是必需的。 
（3）在诱导“愈伤组织”的MS培养基中，使用了以下一些激素组合（如表2），以上培养基均能诱导叶盘缓慢长出黄绿色的愈伤组织，其中组B2和组B3诱导产生的愈伤组织在培养30天后分化出小芽点，并迅速长大成无根苗，两组的分化率分别为25.0%和14.3%。可见0.2mg/LNAA与激动素(6-BA等)配合可诱导栝楼叶片 长出愈伤组织，但不利于诱导愈伤组织 。
（4）科研人员从组培、栽培、野生栝楼的根中提取了总蛋白，并进行了分离与纯化及精细分析，不同来源的根的蛋白质带型差异较大。鉴定蛋白质纯度常用 方法。分析结果显示，栽培（移栽成活1个月的组培苗）和野生栝楼的根都检测到了与对照天花粉蛋白相对应的 ，说明 基因在两种来源的栝楼根细胞中的表达情况相同；而组培根中未观察到任何明显的杂交条带，说明该基因的表达可能还需要 。
（8分，每空1分）下图1表示将人的成纤维细胞与小鼠细胞进行融合，获得部分杂种细胞的过程（注：杂种细胞中人类的染色体会随机丢失，各种杂种细胞保留人类染色体的种类和数量是不同的）。表1表示杂种细胞中基因的存在与人体染色体间的关系。请回答下列问题：
表1杂种细胞中基因的存在与人体染色体间的关系
| 杂种细胞系 |
||||||
| |
|
A |
B |
C |
D |
E |
| 人体基因 |
1 |
+ |
- |
- |
+ |
- |
| |
2 |
- |
+ |
- |
+ |
- |
| |
3 |
+ |
- |
- |
+ |
- |
| 人体染色体 |
1 |
- |
+ |
- |
+ |
- |
| |
2 |
+ |
- |
- |
+ |
- |
| |
3 |
- |
- |
- |
+ |
+ |
注：“+”表示有，“-”表示无
请据图1和表1回答问题：
（1）图1中诱导动物细胞融合常用的诱导因素有 （至少写出两种），再
用特定的 培养基进行筛选，得到杂种细胞。
（2）培养杂种细胞时，根据细胞所需营养物质的种类和数量严格配制培养基，此外经常会在培养基中加入 。培养过程细胞需置于含CO2的混合气体的培养箱中培养，CO2的主要作用是维持培养液的 。
（3）若只考虑人的成纤维细胞与鼠细胞两两融合形成的杂种细胞，假如每种杂种细胞只保留了人的1条染色体，从染色体组成的角度考虑，杂种细胞可能有 种。
（4）据表1推测，第2染色体上有第 基因，可进一步证明萨顿的假说 （萨顿假说的核心内容）是正确的。人体中，第1基因和第 基因的遗传遵循基因的自由组合定律。
下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素）的过程设计图解，据图回答：
（1）图中①、②所示的结构分别是_____________、_____________，④过程常用的方法是___________。
（2）图示治病的方法叫做______________，与一般的异体移植相比最大的优点是___________________。
下图表示番茄植株(HhRr)作为实验材料培育新品种的途径。请据图分析回答：
(1)通过途径2、3获得幼苗的过程都应用了植物组织培养技术，该技术依据的生物学原理是_____ ___。
(2)要尽快获得稳定遗传的优良品种应采用途径________，该过程中秋水仙素的作用机理是________。
(3)品种A与途径3中幼苗基因型相同的概率为________，品种C的基因型是________。
(4)品种C与B是否为同一个物种？________，原因是____________________________。
(5)途径4依据的原理是________，此途径与杂交育种相比，最突出的特点是_________________。
回答有关遗传信息传递与表达的问题。
限制酶能识别特定的DNA序列，并进行剪切。现以2种不同的限制酶对一个5000bp（bp为碱基对）大小的线状DNA进行剪切，相关实验及数据如下表。
| |
第一步水解 |
产物（bp） |
第二步水解 |
产物（bp） |
| 实验1 |
A酶切割 |
2100 |
将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割 |
200、1900 |
| 1400 |
600、800 |
|||
| 1000 |
1000 |
|||
| 500 |
500 |
|||
| 实验2 |
B酶切割 |
2500 |
将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割 |
1900、600 |
| 1300 |
800、500 |
|||
| 1200 |
1000、200 |
|||
| 实验3 |
经A酶和B酶同时切割 |
1900、1000、800、600、500、200 |
（1）由单酶剪切的片段数可知，A酶和B酶的酶切位点分别为_______个和_______个。
（2）图1是经A酶切割后获得的2100bp片段，图 2是经B酶切割后获得的2500bp片段。分别在图中标出该片段在第二步水解时，B酶和A酶的切割位点。
（3）综合实验数据的分析，在图3中绘制出实验3的酶切图谱。
外源基因需导入受体细胞才能使其蕴含的 遗传信息得到表达。图4显示一种外源基因导入受体细胞的方法。
（4）图4所示的导入方法称为_____________________。
（5）在动物基因工程中，受体细胞通常采用______________细胞。
（6）若山羊体内被转入蛋白质药物基因，该基因正常表达，从而在山羊乳汁中获得药物，这就是动物基因工程培育的__________________。
（7）若想上述山羊后代个体都能保持转基因动物的特性，可以结合___________技术繁殖获得后代。
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是 。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和 植株的根尖，通过 、 、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中一定是杂种植株的有 。
（6）对杂种植株进行 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
“白菜—甘蓝”是科学家用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易储存等优点。如图是“白菜—甘蓝”培育过程示意图，请完成下列问题：
（1）培育成白菜—甘蓝植株，采用的技术手段是________。该过程应用的原理是 。
（2）要制备“白菜—甘蓝”的人工种子，要在d步骤选取具有生根、发芽能力的________结构，包裹上人工种皮即可。
（3）在d过程培养中，培养基的成分通常包括水、___ ___、有机营养和_______等，同时，在培养过程中，除必要的温度、光照和氧气等外界条件外，成功的另一个关键是操作过程中必须保证____________。
（4）在a过程中诱导原生质体融合最常用的诱导剂是____________。
（5）要获得图中白菜和甘蓝的原生质体，首先需要分别除去白菜和甘蓝细胞的细胞壁。用以下材料和用具：紫色洋葱鳞片叶、适宜浓度的蔗糖溶液、纤维素酶和果胶酶、蒸馏水、镊子、显微镜、载玻片等,可除去细胞壁。在实验过程中要选取适宜浓度的蔗糖溶液而不用蒸馏水的理由是_____________。
（6）采用特异性引物对另两种植物花椰菜和黑芥基因组DNA 进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种及纯种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中后代性状不分离的是 。
下图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用___________________ 处理，除去_____________；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是___________。化学方法是_____ 融合完成的标志是_______________。
（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用______________技术把D培养成植株。
（3）若A、B是动物细胞，一般取自______________,然后用_____ 使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是____ ____，所形成的D称为____________。
（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了________，注射后小鼠身体产生了相应的____________生成了_____ 。图中B为_____ 。
（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______种，用来培养的D的细胞应该是_____ 。从中选择出它的方法是_______________培养，获得D后，常用的培养方法是______________和________________。
如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：
(1)若A、B是植物细胞，融合完成的标志是 。
(2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用 技术把D培养成植株。
(3)若A、B是动物细胞，一般取自 ，然后用 使其分散开来。
(4)若该过程是制备单克隆抗体，在获得A细胞之前，小鼠注射了抗原的目的是 。注射后小鼠身体产生了相应的免疫反应，生成了 ，图中B为 。
(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，所形成的C有 种，用来培养的D细胞应该是 ，获得D后，常用的培养方法是培养基中培养和 。
下图是动物细胞工程过程中相关的技术操作过程，请据图回答下列问题：
(1)在操作一中，为了使细胞彼此分离，通常是先用剪刀剪碎组织，再用消化法将细胞分开，消化法用的消化酶是胰蛋白质酶，或胶原酶。研究表明胶原蛋白酶和胰蛋白酶在消化时的机制有差异，下表为两种酶活性的比较表。
| 项目 |
胰蛋白酶 |
胶原酶 |
| 消化特性 |
适用于消化软组织 |
适用于消化纤维多的组织 |
| 用量 |
0.01%～0.5% |
0.1～0.3 mg/ml |
| 消化时间 |
0.5～2小时 |
1～12小时 |
| pH |
8～9 |
6.5～7.0 |
| 作用强度 |
强烈 |
缓和 |
| 细胞影响 |
时间过长时有影响 |
时间长时无大影响 |
| 动物血清 |
有抑制作用 |
无抑制作用 |
| Ca2＋和Mg2＋ |
有抑制作用 |
无抑制作用 |
据表中信息可知胰蛋白质酶作用时间需限制在0.5～2小时，原因是________________________________，为了控制胰蛋白酶的消化作用时间，常用消化临界时向溶液中直接加入________即可使酶灭活而终止消化。操作一的原理是__________________。
(2)动物细胞培养液配制好后，通常还要先抽取少许放入培养瓶中，置于37℃、CO2培养箱中24小时后观察，这样做的目的是__________________________。
(3)在动物细胞培养过程中通常要对细胞进行计数，计数的细胞数应为活细胞数。某同学在细胞培养的一次测定中，首先振荡摇匀培养液并立即吸细胞悬液少数向一试管中滴入细胞悬液9滴，再滴入台盼蓝(活细胞染液)1滴，混匀。再从试管中取混合液向计数板边缘轻轻滴1～2滴已染色的细胞悬液，使之充满计数板和盖玻片之间间隙，经测定计数室每小格中活细胞数平均为3个，则原每毫升培养液中含有的活细胞数应为________个。
(4)科研人员研究发现某一种抗原刺激机体后，在鼠体内可发现有多种效应B细胞都可产生针对于该特定抗原的抗体，这些抗体混合在一起即为多克隆抗体。试从抗原结构的角度分析产生该现象的原因是____________________________________。
下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：
(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是 。
(2)图甲中②过程常在 诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是 。
(3)单克隆抗
体能定向攻击癌细胞，主要是利用其 。
(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗？ 
。原因是 。
(5)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能( )
A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优良个体
C．用于保存物种 D．改变动物的核基因
(6)在现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细
胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是( )
A．卵细胞大，便于操作 B．卵细胞含有的营养物质多
C．卵细胞的细胞质可使体细胞核全能性得到表达 D．重组细胞才具有全能性
右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：
（1）步骤①是 ，分离出有活力的原生质体，最常用的
方法是____________
（2）步骤③一般常用的化学试剂是________，目的是诱导不同植物体
细胞的原生质体的融合。
（3）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段
是植物组织培养，其中步骤④相当于___________，步骤⑤相当
于____________。
（4）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使远缘杂交亲本的
遗传特征能够在新的植物体上有所表现，其根本原因__________ _ ______。
（5）若远源杂交亲本A和B都是二倍体，则杂种植株为________倍体。
（6）从理论上讲，杂种植株的育性为______ ___。若运用传统有性杂交
方法能否实现？ 并说明理由____ ____________。
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