(8分)通过现代生物技术可利用动物乳汁生产血清蛋白，下图为相关操作流程示意图。请据图回答：
（1）图示操作过程涉及的现代生物技术有 、 等。
（2）一般情况下，奶牛所产生的能用于体外受精的卵母细胞往往数量不足，通常对供体母牛用 激素处理。
（3）在基因工程中，②为 ，如果②的数量太少，常用 技术扩增，②导入③的常用方法是 。
（4）若⑤为囊胚，⑤→⑥过程为胚胎分割，则该操作的注意点是 。
（9）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是 。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和 植株的根尖，通过 、 、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较 。
（5）采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR 扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株1—4 进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株1—4 中一定不是杂种植株的有 。
（6）对杂种植株进行 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
【生物——选修3：现代生物科技专题】
犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率极高。犬细小病毒单克隆抗体（CPV McAb）可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制,进而杀灭犬体内病毒。请回答：
（1）在单克隆抗体CPV McAb的制备过程中，所用到的细胞工程技术除了动物细胞融合之外还有 技术。
（2）给成年鼠注射CPV ，一段时间后，若鼠血清中抗 的抗体检测呈阳性，说明体内产生了 反应。
（3）将小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌CPV McAb的杂交细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过 培养基筛选出杂交细胞，另一次是通过 筛选出能分泌CPV McAb的杂交细胞。
（4）通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别CPV ，其原因是该抗体具有 的特点。
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶 分别对 进行切割，切割后产生的DNA片段分别为 种。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有 作为标记基因。
（3）研究人员通常采用 法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的 过程。
（选修一选修三任选其一）
I选修一：（除标注外每空2分，共15分）如图表示菊花的嫩枝和月季的花药的离体培养过程，请回答：
(1)对菊花来说，要选取生长旺盛的嫩枝来进行组织培养，其原因是_________________；对月季来说，适宜花粉培养的时期是________期。为确定花粉是否处于该时期，最常用的镜检方法是________。
(2)在培养嫩枝组织和花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有_______________。
(3)两种植物组织培养都需要接种，在进行接种时应注意( )
①接种室要消毒 ②只要戴口罩，操作时便可说话 ③外植体可预先用体积分数为70%的酒精浸泡，取出用无菌水冲洗后，再用0.1%的氯化汞溶液消毒，并用无菌水冲洗干净 ④接种操作要在酒精灯火焰旁进行 ⑤接种完毕应立即盖好瓶盖
| A．①②③④⑤ | B．①②③④ |
| C．①③④⑤ | D．②③④⑤ |
(4)月季的花药培养与菊花的嫩枝组织培养不同，从植物产生的途径来说，花粉植株产生的途径除了图中所示外，还可以通过________阶段发育而来，这两种发育途径的差别主要取决于______________________。
(5)图中的B过程都需要_______，因为愈伤组织形成幼小植物后，植物需要叶绿素进行光合作用。
II选修三：（除标注外每空2分，共15分）下图为培育转基因抗虫棉的技术流程，请据图回答：
(1)质粒上标记基因的作用是 。
(2)过程①是 ，其组成除了目的基因外还必须有___________ _____________以及标记基因。
(3)过程②采用最多的方法是 ，检测抗虫基因是否整合到棉花细胞DNA分
(4)③过程的培养基除含有必须的营养物质、琼脂外，还需要添加 ，④过程的实质是 。
(5)经检测抗虫棉细胞染色体上含有一个抗虫基因，该植株自交得到Fl，其中全部的抗虫植株再自交一次，后代中抗虫植株占总数的 。
[生物——选修3：现代生物科学技术]家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。
（1）进行转基因操作前，需用________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。
（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_______和________之间；若要检测干扰素基因在家蚕细胞中是否表达，可以采用的方法有 、 。
（3）通过PCR技术可大量获取目的基因。PCR反应体系主要包括：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、_____________和______________。
（4）培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
（5）“桑基鱼塘”生态系统能充分利用废弃物中的能量，形成“无废弃物农业”，这主要是遵循生态工程的_____________原理。同时，通过饲养家禽、家畜，栽培食用菌，提高农民经济收入，使保护环境和发展经济相互协调，这又体现了生态工程的__________原理。
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
(1)制备单克隆抗体过程中要用到________和________技术。
(2)在B淋巴细胞内DNA合成有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤所阻断。而骨髓瘤细胞的DNA合成没有S途径。
①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是________。
③培养杂交瘤细胞的条件包括：无菌、无毒的环境、营养、________、________。
(3)哺乳动物在怀孕初期能为胚胎的收集提供可能，这是因为__________________________________；在胚胎移植技术中收集到胚胎后要进行________、________以及移植后的检查等步骤；胚胎移植时可利用激素对受体进行________处理，使受体处于适合的生理状况；此外，受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。
(4)为了更多地生产出人HCG，有人构思采用胚胎分割技术，把一个胚胎分割成很多份数，进而培育出大量相同的转基因牛。你认为这种方法可行吗？为什么？________，_________________。
目前单克隆抗体被广泛应用于癌症等疾病的治疗，比如治疗乳腺癌的曲妥珠单抗，治疗类风湿关节炎的英利昔单抗。以下是制备单克隆抗体Y的过程，请据图回答相应问题。
(1)给小鼠注射抗原的目的是____________________________________
(2)在单克隆抗体制备过程中选用A细胞和B细胞。因为它们融合后的杂交瘤细胞具有____________________________________的特性。
(3)动物细胞融合除了采用植物原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用____________促融。
(4)图中筛选的目的是筛选出____________________________________。
(5)现今市场的鼠源化单克隆抗体已经被全人源化单克隆抗体取代，即表达抗体的基因完全来自人。用____________技术可以让小鼠的B细胞产生人的抗体。
【生物——选修3：现代生物科技专题】请回答下列有关生物工程方面的问题：
（1）目前，科学家通过细胞核移植实验，培育出多种哺乳动物新类型。在哺乳动物的核移植实验中，一般通过 （物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到 阶段时，将胚胎植入另一雌性（代孕）动物体内。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行 处理。另外，培养的卵母细胞需要发育至 ，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。
（3）将已免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌特定抗体的杂交瘤细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过 培养基筛选出杂交瘤细胞，另一次是通过____________筛选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。
（4）若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、 、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的 （填“受精卵”或“乳腺细胞”）。
下图为科学家通过基因工程方法培育转基因抗虫棉的大致过程。请据图分析回答：
（1）图中①过程需要的酶有 ，图中A的组成，除了目的基因外，还必须有________________________________和复制原点。
（2）目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是 ，检测时常采用的方法是 。
(3)图中③过程培育到___________，将其包上人工种皮，可制成神奇的人工种子。
(10分)右图是美国科学家斯图尔德1958年将胡萝卜韧皮部的一些细胞培养成新植株的过程示意图，请据图回答下面的问题。
(1)[4]是由[3]中单个细胞经过________形成的细胞团，细胞分裂方式是________，该细胞团的特点是__________________________________________(2分)，[4]经过________形成[5],最后形成一株完整的植株。
(2)这一事实说明高度分化的植物细胞仍保持着____________________________(2分)。
(3)据此实验可以推断，高度分化的动物细胞，也可能培养出与该动物类似的个体，原因是______ ____ _(3分)
在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因A控制合成的抗冻蛋白A有较好的应用价值，通过转基因技术获得抗寒能力提高的植株。回答有关问题：
（1）从深海鱼提取和纯化DNA时，选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中 的特性，达到分离目的，加入一定量 可以进一步获得含杂质较少的DNA。
（2）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 黏性末端的限制酶。
（3）为了检测A基因转录的mRNA是否翻译成抗冻蛋白A，需从转基因生物提取 ，用相应的抗体进行 。
（4）若要用动物细胞工程技术，制备抗A抗体的杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入 诱导细胞融合。细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A和B的新型药用植物。
回答下列问题：
（1）为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用 酶和 酶 去除细胞壁，获得具有活力的 ，再用化学诱导剂诱导二者融合。形成的融合细胞进一步培养形成 组织，然后经过 形成完整的杂种植株。这种培育技术称为 。
（2）上述杂种植株属于多倍体，多倍体是指 。假设甲与乙有性杂交的后代是不育的，而上述杂种植株是可育的，造成这种差异的原因是 。
（3）这种杂种植株可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到 的等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力，再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。
据图回答下列问题：
（1）过程①所需的酶是 。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是保持原生质体完整性。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）对杂种植株进行 接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
（5）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和 植株的根尖，通过解离 、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在______下观察比较染色体的形态和数目。
【生物：选修3现代生物科技专题】
科学家从某无限增殖的细胞中分离出无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更为广阔的前景。请回答下列问题：
(1)利用_________________技术制备单克隆抗体，常用聚乙二醇、_____________、电激等诱导因素诱导细胞融合。再经多次筛选和细胞培养获得足够数量的能分泌所需抗体的________________细胞。
(2)有人提出用核移植技术构建重组细胞来生产单克隆抗体，请完成设计方案：
①取________________细胞的细胞核，移植到去核的能够________的细胞中，构成重组细胞。(假定移植后细胞核中基因的表达状态不受影响)
②将重组细胞在________条件下做大规模培养或注射到小鼠________内增殖，以获得大量单克隆抗体。
(3)也有人提出，可以直接通过基因工程导入该调控基因(prG)来制备单克隆抗体，其思路如图所示。
①酶A是指______________，酶B是指____________。
②图中Ⅰ表示________________，对Ⅱ进行检测与鉴定的目的_________，Ⅲ具有的特点是__________________________。
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