科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄细胞的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图回答问题。
(1)在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用___________, __________限制酶，分别对_______________, ______________进行切割。
(2)培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入鱼抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体中含有________________________，作为标记基因。
(3)研究人员通常采用农杆菌转化法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用______________________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。
(4)利用组织培养技术将导入鱼抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的____________, ______________过程。
下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：
（1）过程②必需的酶是______________酶，过程③必需的酶是_____________酶。
（2）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶_______________个。
（3）为使过程⑧更易进行，可用_____________（药剂）处理D，使它成为感受态细胞。
（4）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?______，为什么? _________________________。
（5）图中的B起到__________________作用,它应该符合的条件为___________________
___________________________________，能起到这种作用的有______________________
_____________________。图中的D是基因工程中的_______________细胞。
下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
(1)在基因工程中，A→B为_________技术，利用的原理是__________________________，其中①为________________过程。
(2)B→C为抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是_________________。要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体生物学水平上的鉴定过程：
____________________________________________________________________
____________________________________________________________________
下图是利用奶牛乳汁生产人的血清白蛋白的图解,根据下图回答：
（1）为保证被培养的动物细胞处于无菌无毒的环境，通常要在培养液中添加一定量的 ，此外应定期更换 。
（2）获取②的常用方法，除直接人工合成外，还有 、 。基因工程的核心步骤是 。
（3）⑤能在⑥子宫中存活的生理基础是 。
（4）图中①一般经 处理可以得到③。
（5）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的工程技术是 。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎。若④为囊胚，从④到⑤的过程中应注意 。
在1990年，医生对一位因缺乏腺苷脱氨酶基因而患先天性体液免疫缺陷病的美国女孩进行治疗。采用的方法是首先将患者的白细胞取出作体外培养，然后用某种病毒将正常腺苷脱氨酶基因转入人工培养的白细胞中，再将这些转基因白细胞回输到患者的体内，经过多次治疗，患者的免疫功能趋于正常。
（1）该病治疗运用了基因工程技术，在这个实例中运载体是 ，目的基因是 ，目的基因的受体细胞是 。
（2）将转基因白细胞多次回输到患者体内后，免疫能力趋于正常是由于产生了 ，产生这种物质的两个基本步骤是 和 。
［生物——选修3现代生物科技专题］请回答下列有关基因工程的问题：
（1）如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种 片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做这种生物的 。
（2）一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有 ， 以及 。
（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为 。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是 法。转基因动物中采用最多，也是最为有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法是 。大肠杆菌最常用的转化方法是：首先用处理细胞，使细胞处于一种 的生理状态，这种状态的细胞被称作感受态细胞
干扰素是治疗癌症的药物，是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），它必须从血中提取，每升人血只能提取O．05μg，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚的基因公司用下图的方式生产干扰素。试分析原理和优点：
(1)从人的淋巴细胞中取出干扰素基因，使它同质粒相结合，然后移植到酵母菌体内，让酵母菌合成产物。而不是让细菌生产干扰素的原因是 。
(2)如果检测酵母菌细胞中含有合成干扰素的DNA，但却没有合成干扰素，则需要再使用
对 进行检测。
(3)中国青年科学家陈大炬成功地把人的干扰素基因移植到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，试分析：
①人的基因之所以能接到植物体内，其物质基础是 。
②烟草有了抗病能力，这表明烟草体内产生了 。这个事实说明，人和植物共用一套 ，蛋白质合成方式
以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。
（1）获得目的基因的方法通常包括 和 。
（2）切割和连接DNA分子所使用的酶分别是 ______ 和 ____ ___ 。
（3）运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或 _ ，后者的形状成 。
（4）由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行 ____________ 操作。
（5）将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和 序列上是相同的。
选出对应项（每空1分，共6分）
（1） 基因工程中剪切基因的工具
| A．细菌在发酵罐内发酵 （2）人工育种常用的处理手段 |
B．限制酶 （3）基因工程中拼接基因的工具 |
C．辐射 （4）杂交育种利用 |
D．基因自由组合原理 |
（5） 搬运目的基因的运载工具 E.DNA连接酶
（6） 大量表达目的基因常用的手段 F.细菌质粒或噬菌体
继哺乳动物乳腺发生器研发成功后，膀胱生物发生器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是___________。
（2）进行基因转移是，通常要将外源基因转入_________中，原因_____________。
（3）通常采用______ _技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的________细胞中特异表达。
（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠细胞的_____转入________细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术为__ ___。
Ⅰ．ch1L基因是蓝细菌（蓝藻）DNA上控制叶绿素合成的基因，为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建并获得缺失ch1L基因的蓝细菌细胞。技术路线如图甲所示，请据图分析回答问题。
（1）与酵母菌相比较，蓝细菌在结构上最主要的特点是_____________，在代谢上最主要的特点是能进行________作用。
（2）①②过程中均使用的工具酶有_________________。
（3）构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是__________和___________。
Ⅱ．人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答下列问题。
（1）制备单克隆抗体过程中要用到________技术和___________技术。
（2）在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的_______________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_______________。
（3）此过程生产的单克隆抗体可以与________特异性结合，从而诊断早孕。
胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培养试管牛的过程。
（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是___________________；从良种公牛采集的精子需________后才能进行受精作用。
（2）在体外培养受精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供________气体以维持________。
（3）图中过程A称为________，它在胚胎工程中的意义在于________________________。
（4）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是________；获得转基因母牛后，如果____________________，即说明目的基因已经表达。
下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。
资料1 巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，同时AOX1基因也会因受到诱导而表达。[5ˊAOX1和3ˊAOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。
资料2 巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，需要用到_____ ___处理。
（2）获取HBsAg基因时，可利用 、 方法获取。
（3）构建的重组质粒中有5ˊAOX1、 3ˊAOX1(TT)和HBsAg基因外，还应有 。
（4）步骤1中的方法是 ，此时的大肠杆菌处于 状态。
（5）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用__________________方法进行检测。
（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行____ ____并分泌到细胞外，便于提取。
回答基因工程的有关问题：(共9分)
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____（相同，不同）黏性末端的限制酶。
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因等，其中RNA聚合酶识别和结合的部位是_____。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入。为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用放射性同位素标记的______ 作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成胰岛素，常用______ 技术。
(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_____中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______上。
为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
（1）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的_____处，DNA连接酶作用于_______处。（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和_____________法。
（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用____________________技术，该技术的核心是________________和_________________。
（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______________做探针进行分子杂交检测，又要用________ _____方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
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