某科研公司应用一定的生物工程技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白以满足临床需求，大致过程如下图(说明：将人血清白蛋白基因导入“雌性奶牛胚胎”的细胞中，形成重组细胞①)。请回答下列问题:
(1)重组细胞 (填“①”或“②”)实现了基因的重组，此技术的最核心步骤是 。
(2)通过核移植技术最终产生克隆动物，体现了 的全能性。胚胎工程操作中最后环节是 。
(3)该过程培养的牛被称为克隆牛。与其相比，试管牛培育过程特有的生物技术是
(4)若将胚胚进行分割，将来发育成的多个子代小牛的基因型 (填“相同”或“不同”)，操作过程需要特别注意的问题是 。否则会影响胚胎的恢复和进一步发育。
(5)运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞(ES细胞)，培养过程如下:早期胚胎→内细胞团→胚胎干细胞。在培养过界中，必须用 处理内细胞团，使之分散成单个细胞，为了维持此细胞不分化的状态一般将ES细胞在 细胞上或在添加抑制因于的培养液中进行培养。
(6)哺乳动物的胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及 等物质。
利用乳腺生物反应器获取药用蛋白具有产量高、成本低等优点。下图为培育转基因奶牛获得人血清白蛋白的流程。
请回答：
（1）PCR扩增人血清白蛋白基因使用的酶是 。要使人血清白蛋白基因在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，应将其与 基因的启动子等调控组件重组。
（2）过程②包括 技术和胚胎移植技术；可用 技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊。
（3）若要检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用 技术。
一对表现型正常的夫妇，生了一个镰刀型细胞贫血症（常染色体隐性遗传病）患儿。在他们欲生育第二胎时，发现妻子的双侧输卵管完全堵塞，不能完成体内受精。医生为该夫妇实施了体外受精和产前基因诊断，过程如图。请回答：
（1）过程①是指在体外进行的 处理，从而使精子与卵子结合形成受精卵；过程②称为 。
（2）在对胎儿进行镰刀形细胞贫血症的产前基因诊断时，要先从羊水中的胎儿细胞提取物质③ 进行PCR扩增。然后用
Ⅱ对扩增产物进行切割，产生多个片段的酶切产物。据此判断，Ⅱ是一种
酶。
（3）不同长度的酶切产物在电泳时移动的速率不同，形成不同的电泳条带。该家庭成员的镰刀型细胞贫血症基因分析的电泳带谱如④，据此判断胎儿为
（正常/患者/携带者）。
《时代》杂志评出的2007年十大科学发现中指出，美国及日本两个研究团队的报告中证实皮肤细胞经过“基因直接重组”后可以转化成为具有胚胎干细胞特性的细胞。请回答下面有关胚胎工程的若干问题。
（1）在胚胎发育中，根据胚胎形态的变化，可将早期发育的胚胎分为 、 、 三个阶段。
（2）胚胎工程中的胚胎移植实际上是生产胚胎的 和孕育胚胎的 共同繁殖后代的过程 。胚胎移植能否成功，与供受体的生理状况有关： ，为胚胎的收集提供了可能； ， 为胚胎在受体内的存活提供了可能；而且供体胚胎可与受体子宫建立正常的 ，但移入受体的胚胎的遗传特性不受任何影响。
（3）哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，是由 分离出来的一类细胞。美日科学家的研究过程是利用病毒分别将四个基因送入皮肤细胞，促使普通的皮肤细胞产生变化，最后成为带
有 性质的细胞，称为诱导式多能性干细胞（iPS）。在基因工程中，这四个基因称为 ，所利用的病毒称为 。 与借助胚胎提取胚胎干细胞比较，这样获得的干细胞的研究，其最大突破就是在不破坏胚胎的前提下提取可以复制成器官或组织的细胞，不仅避开了长期以来有关生物技术
的 方面的争议，也使其来源更加广泛而方便。
牛胚胎移植的基本程序如图，请据图回答：
(1)图中a、b、c过程分别是指________ 、________、________。
(2)对供体母牛的选择要求是______________ ；对受体母牛的选择要求是_______________________________________。
(3)为了提高牛胚胎的利用率，常采取的方法是________；处理的时期是_________，分别发育成小牛，这可以看作动物的________(繁殖方式)。
(4)从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。培养如下：早期胚胎→内细胞团→胚胎干细胞。在培养过程中，必须用________处理内细胞团，使之分散成单个细胞。EK细胞的功能特点是_______________________________________
培养哺乳动物的胚胎的营养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及________等物质。
(5)胚胎移植的实质是什么?
从胚胎移植的现状看，胚胎移植的优势是什么?
答案：(1)超数排卵 冲卵 胚胎移植
(2)遗传性能和生产性能优良个体 健康的体质和正常繁殖能力的同种母牛
(3)胚胎分割（移植）技术 桑椹胚或囊胚期 相同
(4)胰蛋白酶 动物血清 具有发育的全能性
（5）实质：早期胚胎在相同生理条件下空间位置的转移
优势：可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力
阅读下列材料，结合所学知识回答问题：
2012年诺贝尔生理学或医学奖授予英国和日本两位科学家。他们所做的细胞核重编程就是将成年体细胞重新诱导回早期干细胞状态，用于形成各种类型的细胞，创造了诊断和治疗疾病的新方法。请回答下列问题：
（1）在胚胎工程中，胚胎干细胞可来自于囊胚的 ，它能被诱导分化为多种细胞、组织，说明它具有 的特性。
（2）培养胚胎干细胞的关键是要有一种既能促进细胞分裂又可抑制 的培养体系，一般我们在培养胚胎干细胞时可以采用 作为饲养层来实现。
（3）若下图为运用胚胎干细胞核移植技术进行高等动物克隆的模型图，则C→D一定包含 和 技术。
赖氨酸是人体必需氨基酸之一，可促进人体发育、增强免疫力。乙图为赖氨酸转基因克隆牛的培育流程，其中字母表示相应的操作过程。请回答：
(1)构建基因表达载体的过程如甲图所示，其中Pst I、Sma I、EcoR I、Apa I为四种限制酶，该过程中所使用的限制酶是_________和_________，除限制酶外，该过程还需要的工具酶有_________。基因表达载体除图示结构外，还应含有__________和终止子等结构。
(2)为了获得较多的卵母细胞需要对供体注射______________，卵母细胞要培养至 时期，才具备受精能力。
(3)胚胎成纤维细胞在培养过程中会出现_____________和____________现象，分瓶时需用______处理以得到细胞悬液，进而进行__________培养使细胞增殖。
(4)图乙中a、b过程利用的主要生物技术有_____________和______________。
下面是畜牧业生产上培育某种优良种牛的两种方法，请分析回答：
(1)方法I和方法Ⅱ均用到的主要生物技术有动物细胞培养、早期胚胎培养和___________。
(2)用___________处理使B牛超数排卵,从B牛体内获得的卵母细胞需要培养到___________（时期）才能与精子结合。
(3)A牛的精子必须在B牛的生殖道中经过相应的生理变化后，才能与B牛的卵细胞结合，卵子受精的标志是在卵细胞膜和透明带的间隙能够观察到___________。完成受精作用一段时间后，从B牛输卵管中冲出早期胚胎，这个过程叫___________。
(4)生产上常用___________期的胚胎进行胚胎移植。若希望同时获得多个性状相同的家畜个体，可以使用___________技术。
（5）获得试管牛E和克隆牛F的生殖方式分别是___________、_________________。
克隆猪成功率较低,与早期胚胎细胞的异常凋亡有关。Bcl
2基因是细胞凋亡抑制基因,用PCR技术可以检测该基因转录水平,进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如下图。
请回答:
(1)图中重组细胞的细胞核来自 细胞,早期胚胎移入受体子宫后继续发育,经桑椹胚、囊胚和 胚最终发育为克隆猪。
(2)在PCR过程中可检测出cDNA中Bcl2 cDNA的分子数,进而计算总mRNA中Bcl2 mRNA的分子数,从而反映出Bcl2基因的转录水平。
①图中X表示 过程。
②从基因组数据库中查询Bcl2 mRNA的核苷酸序列,以便根据这一序列设计合成 用于PCR扩增,PCR过程第一轮循环的模板是 。
下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答：
(1)结构a表示 ；①所示的生物技术名称是 ，该项技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为 。
(2)结构b表示 ，其在功能上具有 。将健康胰岛B细胞基因导入b之前要构建 ，这是基因工程的核心。
(3)②所示的生物技术名称是 。培养重组细胞B的培养液中，营养成分包括糖、氨基酸、元机盐、 、 、血清或血浆等。
(4)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是 。这种基因治疗所属类型为 。
下图为小白鼠的胚胎干细胞分化示意图。
请回答：
(1)图中分化程度最低的是_________。在体外培养条件下，培养液中加入________因子，可诱导胚胎干细胞向不同类型的组织细胞分化。科学家将小鼠已分化体细胞的细胞核移入卵母细胞质中，培育出“克隆鼠”，这里用卵母细胞的原因是：__________________________________________。直到今天也不能用类似_________(某种植物细胞工程的技术手段)的方法直接获得完整的动物个体。因此，培育“克隆鼠”过程，实际是通过________(某种动物细胞工程的技术手段)来实现的。
(2)在培育转基因鼠的过程中，人们将关键基因通过逆转录病毒转入小白鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞。在该技术中，逆转录病毒是关键基因进入成纤维细胞的________，它能够携带外源基因进入受体细胞。
(3)在制取单克隆抗体过程中，用_________细胞与骨髓细胞融合，经多次筛选最终得到能分泌_____________的杂交瘤细胞。
治疗性克隆是指把患者体细胞核移植到卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。请回答下列问题：
（1）治疗性克隆采用的技术有______________________________、早期培养和__________________。将患者体细胞注入去核卵母细胞后用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成____________和发育进程。
（3）为治疗遗传性糖尿病，可将胰岛素基因导入ES细胞中，再将此重组细胞定向诱导分化后，筛选得到能__________________的胰岛样细胞，并扩增培养后输入患者体内，这种治疗方法称为__________________。
（4）中国政府不反对治疗性克隆，但禁止__________________。
（5）若想促提取ES细胞中的DNA，可利用DNA不溶于______溶液，但细胞中的脂质和某些蛋白质易溶于此溶液的原理进一步分离。
应用生物工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：
⑴①过程是指 ，被称为基因工程的核心步骤。
⑵③过程采用的技术包括 。③过程培养到桑葚胚或囊胚阶段，可以采用 技术，培育出多头相同的转基因牛犊。受体母牛在接受转人生长激素基因牛胚胎之前须经过 处理，以便为胚胎发育提供相同的生理环境。
⑶有人发现prG能激发细胞不断分裂，可以通过基因工程将该调控基因导入特定的受体细胞来制备单克隆抗体，受体细胞Ⅱ最可能是 细胞，Ⅲ代表的细胞具有 ____________特点。
⑷在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是 ，⑤过程常用的生长调节剂一般可以分为生长素类、 、赤霉素类。
请回答胚胎工程和细胞工程方面的问题：
（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精 、________________以及在母体中发育和产出等过程。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其 。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和 。
（3）随着转基因成果的不断涌现，人们对转基因生物是否安全表现出了担忧，在 安全、 安全和环境安全三个方面发生了激烈的争论。
（4）将胚胎干细胞置于成纤维细胞的饲养层上，并加入动物血清、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的 ，加入抗生素是为了 ，这对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。
（5）在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是 。
（6）单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出 ，第二次筛选出 。
（7）通过体细胞核移植技术，从患者自身上取出体细胞，将其细胞核植入去核的卵母细胞，从而获得早期人类胚胎，然后再从中培育“患者自身的”胚胎干细胞供医学临床使用的技术叫做“ ”。这一技术也可以用来研究“克隆人”，中国政府对生殖性克隆人研究所持态度的“四不原则”是：
不接受任何生殖性克隆人的实验。
转基因克隆猪已经在我国培育成功。研究组首先从猪胎儿皮肤中分离出纤维细胞，进行体外培育。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将基因纤维细胞进行体细胞克隆。接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪。请回答：
（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的 ，以防止培养过程的污染，此外，应定期更换 ，防止 对细胞自身造成危害。
（2）筛选转基因细胞时，需要利用基因表达载体中 的作用。
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集 ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞注入到 中 ，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎。
（4）为了 ，可以对处于 阶段的胚胎进行均等分割。将重组胚胎移入到受体子宫中，由于受体子宫不会对外来胚胎发生 ，并能与之建立正常的生理和组织上的联系，因次，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪。
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