人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：
(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有。
(2)若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过等过程制成装片，然后在显微镜下观察。杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是，在HAT培养基上存活的细胞可能包括(填下列序号)。①无抗体分泌的细胞②抗HPV抗体的分泌细胞③其它无关抗体的分泌细胞
(3)对于抗体检测呈性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～l0个细胞/mL，每孔加入细胞稀释液mL(0.1／1／10)，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是。
(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路。
（1）基因表达载体含有目的基因、标记基因、启动子和终止子四个部分，其中启动子的作用是，而终止子上特殊的碱基序列能够阻碍的移动，并使其从模板链上脱离下来。
（2）基因工程操作过程中，将目的基因导入植物受体细胞时，一般采用法，选择做运载体：若导入动物细胞则采用法，而细菌作为受体细胞时应用溶液处理使其成为感受态细胞便于吸收游离的DNA。
（3）动物细胞培养中需要使用胰蛋白酶而不是胃蛋白酶处理分裂能力旺盛的组织或器官，是因为。细胞培养时培养液中一般需加入动物血清，其作用是。
（4）胚胎分割技术是指采用机械方法将早期胚胎切割成多个等份，然后经移植后获得同卵双胎或多胎的技术，因后代遗传物质相同，故我们可将此技术认为是生殖。大量的实验证明同卵多胎成功的概率极低，其可能的原因是。
下图为单克隆抗体的制备过程，请据图回答问题：
（1）在获得B淋巴细胞之前，小鼠已被多次注射了（相同/不同）抗原，注射后小鼠体内发生相应的（细胞/体液）免疫反应，生成能产生抗体的B淋巴细胞。
（2）①过程中，常用的与植物细胞融合相同的方法是试剂诱导融合。融合结果随机出现多种不同的杂交细胞。②过程为选择培养基培养，从而得到细胞。③过程为克隆培养并检验，从中选出。
（3）④为目的细胞的扩大培养，既可以培养，也可以注射到小鼠体内培养。从细胞培养液或小鼠腹水中就可以获得大量单克隆抗体。
（4）由于单克隆抗体具有、，并可能大量制备的特点，广泛用于疾病的诊断等方面。
下图为某基因型AaBbDD的雌性动物细胞生命历程中的部分过程，请据图回答问题
（1）上图中过程①为________________分裂，甲细胞的名称为________________。
（2）若图甲中1表示性染色体，则2、3、4表示_____________，与本次分裂同时产生的配子的基因型为________________。
（3）乙细胞经过②过程形成的子细胞中分化成了不同种类的细胞，从根本上说，这是____________________________的结果；但是也有部分细胞变成了癌细胞，这是因为在致癌因子的作用下，_________________发生了突变。
（4）PM2.5是指大气中直径小于或等于2.5微米的颗粒物，也称为可入肺颗粒物。PM2.5的浓度值以每立方米的微克值来表示，目前中国的标准是24小时平均浓度小于75微克/立方米为达标。随着全国各地空气出现严重污染，我国多个城市发生雾霾天气，PM2.5屡屡爆表。同学们想了解PM2.5的空气是否对细胞发生影响，设计了如下实验，请根据实验方案回答问题。
实验材料：在雾霾天气收集到的PM800的空气，经过净化后的新鲜空气，生理盐水，细胞培养液（含有全部营养物质与等量的小鼠胚胎干细胞），试管等。
实验的主要步骤如下表所示：
 试管编号步骤 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
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| I |
加入等量的细胞培养液（含有全部营养物质与等量的小鼠胚胎干细胞） |
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| II |
计算培养皿内的细胞数目，记录数据 |
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| III |
密闭培养，并通入 a |
密闭培养并通入 b |
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| IV |
在冰箱中培养，并适时的震荡搅拌 |
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| V |
一段时间后，观察试管内的细胞____c______ |
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①完成步骤Ⅲ，a：；b：；c：_______________
②纠正上述步骤中的错误：。
③预测一种最可能的结果并得出相应的结论
结果_____________________________________________________________；
结论______________________________________________________________。
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：
据图回答下列问题：
(1)过程①所需的酶是______________________________________________________。
(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是________________。原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
毛角蛋白Ⅱ型中间丝(KIF Ⅱ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIF Ⅱ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
(1)过程①中最常用的运载工具是，所需要的酶是限制酶和。
(2)在过程②中，用处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5% CO2的气体环境中，CO2的作用是。
(3)在过程③中，用处理以获取更多的卵(母)细胞。成熟卵(母)细胞在核移植前需要进行处理。
(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是。在胚胎移植前，通过技术可获得较多胚胎。
科学家从悬浮培养的单细胞、离体花粉或胚囊中，通过植物组织培养技术获得胚状结构(胚状体)，胚状体不同于一般的种子胚，是由非合子细胞分化形成的类似于胚的结构物，所以，又称“体细胞胚”或“花粉胚”。胚状体在一定的条件下，可以通过个体发育过程形成植株。将其包埋在一个能提供营养的胶质中，外包裹上人造种皮，便制成了“人工种子”。人工种子的概念是1978年在加拿大举行的第四届国际植物组织、细胞培养会议上首次提出来的。目前，我国科学家利用植物组织培养技术已在烟草、水稻、小麦和玉米等植物上成功诱导出胚状体，而美、日、法等各国正着手将人工种子市场化、商品化。
(1)简要归纳“离体的细胞”进行植物组织培养获得胚状体的过程 。
(2)“人工种子”大体由胚状体、包埋胚状体的胶质以及人造种皮等三部分组成。包埋胚状体的胶质中富含营养物质，这是因为 。为了满足胚状体代谢的需求，“人造种皮”则必须具有良好的 性能。
(3)由“人工种子”萌发出的植株是否可育？
___________________________________________________________。
(4)写出“人造种子”商品化的意义（两项） ，
__________________。 (5)利用人工种子繁殖后代属于 。
弓形虫是一种寄生在真核细胞内的寄生虫，会引起人畜的弓形虫病。
（1）弓形虫进入机体后，被吞噬细胞摄取和处理。吞噬细胞将抗原传递给，刺激其产生，B细胞受到抗原刺激后，在相关物质的作用下，增殖分化形成，产生抗体。当弓形虫进入宿主细胞后，细胞可以与靶细胞密切接触，使靶细胞裂解死亡。
（2）科研人员利用弓形虫引起机体特异性免疫反应的主要抗原进行单克隆抗体的制备。首先将免疫过的小鼠脾脏细胞取出，与融合，此过程除采用物理、化学方法外，还可采用诱导融合。然后经选择性培养基培养筛选，获得的杂交瘤细胞不仅能，同时还能产生所需的特异性抗体。
（3）为研究上述单克隆抗体对弓形虫的作用，首先将弓形虫置于含一定浓度单克隆抗体的培养液中培养1小时，然后将其与具有连续分裂能力的动物细胞共同培养，培养不同时间后分别测量细胞数量（结果如下图所示）。
此实验设置了与具有连续分裂能力的动物细胞共同培养作为对照。分析实验结果可以得出的结论是。
（4）科研人员给小鼠注射适量的上述单克隆抗体溶液，然后又注射了弓形虫，实验结果表明小鼠的生存时间虽有延长，但最终仍会死亡，可能的原因是注射的弓形虫的量太大，且机体内针对弓形虫的免疫本应
以为主，所以导致体内实验的效果不理想。
下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。请根据示意图回答下列问题。
（1）单克隆抗体技术是______________技术中最重要的用途。将特定的抗原注入小鼠体内，其目的是使小鼠产生__________细胞。
（2）单克隆抗体的化学本质是__________；合成与分泌单克隆抗体涉及到的细胞器是__________、__________、__________、__________。
（3）骨髓瘤细胞与某些淋巴细胞混合在一起，细胞融合完成后，在培养基中有_____种两两融合的细胞，融合的原理是__________，融合的方法除了电激外，还可以用化学诱导剂__________或灭活的_______________。
（4）从图中可以看出，单克隆抗体制备经过了_____次筛选，第一次筛选得到的细胞是__________，该细胞的特点是既能在体外_____，又能分泌_____抗体。
[生物—选修3：现代生物技术专题]
如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程：图2表示体外受精培育优质奶牛的过程：图3表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程，请据图回答下列问题：
（1）图1 中制备单克隆抗体的过程中，需要经过两次筛选，其中第二次筛选的目的是筛选出 。该过程所用到的生物技术有 。
（2）图2 参与体外受精的精子需要经过成熟和 的过程，才能是卵细胞受精，若要获得多头于此优质奶牛相同的小牛，可对图2中囊胚中的 均等分割后进行胚胎移植，以上技术是在 （填“体外”或“体内”）完成的。
（3）图3中过程③常用的试剂是 。融合的原生质体形成杂种细胞的标志是 ，该过程与细胞中 （细胞器）的活动密切相关。
（4）过程⑤和⑥分别表示 和 。
下图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程;图2表示培育优质奶牛的过程。请据图回答下列问题:
(1)图1中注射到小鼠体内的物质是 。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想细胞,此类细胞的特点是 。该过程所用的生物技术有 。
(2)重组细胞①和②中, (填“①”或“②”)实现了基因的重组。
(3)若将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞,让其分别发育成小牛,这些小牛的基因型 (填“相同”或“不同”),理由是 ,此项技术称为 。
(8分)科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接,实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造,生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体,用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程。请据图回答下列问题。
(1)鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞,在诱导剂的作用下与融合,形
成细胞,并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较,最主要的优点于,可大量制备。
(2)与植物原生质体的融合相比,动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用诱导融合。
(3)生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞,主要原因是。
(4)为了能确定目的基因已经导入鼠淋巴细胞中，相应的载体需要有以便于进行检测；改造抗体属于工程的范畴。
人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，且疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图：
（1）过程①代表的过程是，过程⑦的实验技术名称是。
（2）过程③构建出的表达载体必须要含有、、和目的基因等结构。
（3）过程⑥发生的生理过程是。
（4）生产药物时可用微生物做受体细胞，那么④应采用处理，使受体细胞处于，从而将表达载体导入受体细胞；药物生产也可用乳腺生物反应器，那么④则应采用的方法，从而将表达载体导入受体细胞。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的作疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行比较；或用图中的进行特异性结合检测。
研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。
（1）选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中___________（填“低表达”或“高表达”）。H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如右图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建___________区基因，转入原核细胞表达并提纯。
（2）将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠的脾脏细胞与___________细胞进行融合，使用的化学诱导剂是______________，细胞融合的原理是_________________。
（3）将融合细胞在__________培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取有克隆生长的细胞培养孔中的________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用____________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
（4）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过_____________或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体。
（5）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞。这充分体现了单克隆抗体______________的特点。
犬细小病毒（Canine Parvovirus，CPV）主要感染幼犬，传染性极强，死亡率极高。犬细小病毒单克隆抗体（CPV McAb）可抑制病毒对宿主细胞的侵染及病毒的复制,进而杀灭犬体内病毒。请回答：
（1）在单克隆抗体CPV McAb的制备过程中，所用到的细胞工程技术除了动物细胞融合之外还
有技术。
（2）给成年鼠注射CPV ，一段时间后，若鼠血清中抗的抗体检测呈阳性，说明体内产生了反应。
（3）将小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能分泌CPV McAb的杂交细胞的过程中至少要进行两次筛选，一次是通过培养基筛选出杂交细胞，另一次是通过筛选出能分泌CPV McAb的杂交细胞。
（4）通过上述方法得到的单克隆抗体可快速准确地识别CPV ，其原因是该抗体具有的特点。
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