转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：
（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶 和 ，对
、 进行切割。
（2）培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有 ，作为标记基因。
（3）香蕉组织细胞具有 ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的 、 。
某医院病理室为确诊一患者的肿瘤是良性还是恶性，切取了一小块肿瘤组织进行培养。请回答下列问题：
①培养之前，肿瘤组织必须先用 等处理成单个细胞。
②若开始培养时取一滴培养液观察有100个肿瘤细胞，经24h培养后，取一滴稀释100倍后再取一滴(设三次的“一滴”等量)观察，发现有64个肿瘤细胞，此肿瘤的细胞周期约为 h。
③与正常细胞相比，在显微镜下可见明显增多的细胞器是(两项) 。 ④某科研单位研制出一种新型药物X，据说对此类肿瘤有较好的疗效，请你设计一个方案加以验证。写出你所设计的实验步骤：
a． ；
b． ；
c． 。
自然界的细胞融合产生有性后代，细胞工程中细胞杂交被广泛应用于培育杂种植株和生产单克隆抗体等方面。请回答以下相关问题：
（1）若a、b分别为精子和卵细胞，则产生a、b的分裂方式是________________________。
（2）若a、b表示体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是________________________，
其中使用了植物组织培养技术，该技术的中心环节是形成愈伤组织，然后诱导它再分
化形成植株，再分化的原理是 ，植物体细胞杂交的意义是该技术
能克服________________________________。
（3）生产单克隆抗体时一般不直接培养效应B细胞，主要原因是_________________，若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞器中出现的先后顺序是 。
下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答问题：
(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是__________________。
(2)图甲中②过程常用的诱导因素有______________________________等（至少回答三项）。
(3)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗? _____________。原因是_______________________________________________。
（4）在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为哪个是最主要原因 （ ）
| A．卵细胞大，便于操作 | B．卵细胞含有的营养物质多 |
| C．卵细胞的细胞质可使体细胞胞核全能性得到表达 | D．重组细胞才具有全能性 |
（5）图甲中有两次筛选过程，第一次可以筛选出 ，第二次可筛选出 。
（6）单克隆抗体最主要的优点在于___________________________________________。
（7）静脉注入而不是口服单克隆抗体的原因是 。
科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程。请据图回答：
(1)鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与_______融合，形成_________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于______________可大量制备。
(2)与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用_________________诱导融合。
(3)生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是_____________________。
(4)科学家通过基因拼接，将鼠源抗体基因改造成鼠—人嵌合抗体基因，然后导入到鼠淋巴细胞中，这个过程中用到的工具酶有________、________，改造抗体属于________工程的范畴。
运用动物体细胞杂交技术可实现基因定位。研究发现：用人的细胞与小鼠体细胞进行杂交得到的杂种细胞含有双方的染色体。杂种细胞在持续分裂过程中仅保留鼠的染色体而人类染色体则逐渐丢失，只剩一条或几条。右图是人的缺乏 HGPRT 酶突变细胞株（ HGPRT-）和小鼠的缺乏 TK 酶细胞株（TK-）融合后并在 HAT 培养液中培养的过程，结果表明最终人的染色体在融合细胞中仅存有 3 号染色体或 17 号染色体或两者都有。已知只有同时具有 HGPRT 酶和 TK 酶的融合细胞才可在 HAT 培养液中长期存活与繁殖。
⑴体细胞杂交克服了 ▲ ，过程①常用的生物方法是 ▲ 。
⑵过程②中，为了防止细菌的污染，所用培养液应该添加一定量的 ▲ ，此外还要定期用 ▲ 处理细胞，使贴壁生长的细胞脱落形成细胞悬液。
⑶从培养过程看HAT 培养液不仅能提供养料，还起 ▲ 作用。
⑷从图示结果看，可以确定人的 ▲ 基因位于 ▲ 号染色体；该方法可以对鼠基因定位吗？ ▲ 。
科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。下图表示形成鼠—人嵌合抗体的过程。请据图回答：
（1）鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与________细胞融合，形成_________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于______________________，可大量制备。
（2）与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用________________________诱导融合。
（3）生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是__________________________。
（4）通过基因拼接，将鼠源抗体基因改造成鼠—人嵌合抗体基因，然后导入到鼠淋巴细胞中，这个过程中用到的工具酶有__________、__________，改造抗体属于________工程的范畴。
依据基因工程技术和细胞工程有关原理回答下列问题：
（1）基因工程操作的基本步骤是：
① ____ __； ② ____；
③ ____； ④ __。
（2）获取目的基因途径有 、 。
（3）下图是将人类的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图，所用的载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒导入细菌B后，其上的基因能得到表达。简述重组质粒的主要过程包括：
① ；
② ；
③ 。
④导入细菌B细胞的目的基因成功表达的标志是什么？ ______。
据英国著名医学杂志《柳叶刀》网站2006年4月4日公布的研究报告说，美国科学家已经在实验室中成功培育出膀胱，并顺利移植到7名患者体内。研究人员将肌肉细胞和膀胱上皮细胞分别置于不同的培养皿中培养，约一周后将这些细胞放在一些海绵形状的可生物降解的由胶原质制成的“支架”上继续培养，再过7周左右，原先的数万个细胞已经繁殖到15亿个左右，布满“支架”，膀胱上皮在内，肌肉在外。医生将“新膀胱”移植到患者膀胱的上面。这样新器官会继续生长并与老器官“重组”取代老器官中丧失功能的部分。培育过程如图。
根据以上资料回答下列问题：
（1）a过程属于细胞工程中的___________细胞培养，其培养基与植物细胞培养培养基的主要不同点是前者含有________________。
（2）肌肉细胞和膀胱上皮细胞应放到含_______气体环境的培养箱中，培养中会出现______________________等现象，贴满瓶壁的细胞重新用____________________处理，分瓶继续进行传代培养，传代50代以上的细胞称为_____________，这些细胞已经突变，朝着等同于癌细胞的方向发展。
（3）新器官与老器官的“重组”是否为基因重组?为什么?______________________ ；__ 。
（4）用接受移植者的体内细胞培育出“新膀胱”不会发生排异现象，请举一与之相似的实例：_______________________________________________________。
将正常小鼠的胚胎干细胞在特定条件下培养，形成某种细胞团，再将其移植到患糖尿病小鼠的体内，每天测量小鼠的血糖变化情况，得到曲线如下图。
（1）实验中非移植组的小鼠 （患、不患）糖尿病。
（2）患糖尿病的小鼠由于缺乏 ，导致血糖浓度偏高，移植后第 天小鼠的血糖水平开始恢复正常，说明诱导后形成的细胞团所具有的功能与 细胞相似。
（3）诱导后形成的细胞团在形态、结构和功能上与胚胎干细胞相比有很大变化，该细胞团的形成经历了细胞分裂与 的过程。
右图为细胞融合的简略过程，请据图回答：(16分)
(1)若A、B是植物细胞，在细胞融合之前应用_____ __处理，除去______ _；A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是_____________。
(2)若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用______ ________技术把D培养成植株。
(3)若A、B是动物细胞，一般取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织,然后用 _____ __使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的手段是_______ ____，所形成的D称为_____________。
(4)若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠B淋巴细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了__________，注射后小鼠身体形成了相应的___________能分泌___________。图中B为_______________。
(5)若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有______种，用来培养的D的细胞应该是_____________。从中选择出它的方法是用_______________进行筛选，获得D后，常用的培养方法是______________和________________。
现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列有关问题：
Ⅰ．实验原理： 。
根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。
Ⅱ．材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、适宜浓度的化学物质甲溶液、适宜浓度的化学物质乙溶液、蒸馏水、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常有丝分裂各时期的高倍显微照片。
Ⅲ．实验步骤：
（1）制备细胞悬浮液。
把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。
（2）进行细胞培养。
①取A、B、C 3个洁净的培养瓶， ；
②A、B两个培养瓶中分别加入等量的甲、乙溶液。C瓶中加入等量的蒸馏水，摇匀；
③
（3）制作临时装片。
①当细胞增殖到大约8代左右时，同时从恒温箱中取出3个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，加入动物细胞固定液，迅速杀死细胞并固定细胞分裂相；
②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央， ，3min~5min后，盖上盖玻片。
（4）镜检和统计。
把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于 期的细胞，并与 进行对比，统计并计算该期变异的细胞占该期细胞总数的百分数（Q值）。
Ⅳ．结果分析与结论：
（1）经研究人员实验得知，A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知该实验的结论是 。
（2）在实验中，C培养瓶起 作用，C瓶的Q值说明 。
植物细胞原生质体的制备是植物体细胞杂交、原生质体转化等技术的基础。下图表示利用机械法和酶解法制备原生质体的简要过程，请据图回答：
（1）将植物叶片放在较高浓度的蔗糖溶液中，一段时间后，在细胞的细胞壁和细胞膜之间充满了___________，原因是______________________。
（2）机械法是指剪碎已经发生质壁分离的组织时，有些细胞只被剪去细胞壁，释放出完整原生质体的方法。使用这种方法，蔗糖溶液浓度对获得原生质体的数量和活性有很大影响，浓度过低会造成___________，易剪碎原生质体；浓度过高，则会使___________。
（3）用酶解法制备原生质体的过程中，一般使用___________处理叶片。与机械法相比，酶解法的优点是_________________________________。
野生马铃薯品种的植株具有较强的抗病、抗虫、抗盐碱、抗寒能力，但块茎不能食用。俄、德、芬兰专家共同做实验研究，用野生马铃薯与马铃薯的体细胞进行杂交，培育出了生活能力强的杂交系马铃薯。
(1)专家在实验中，需用到的酶主要有 和 酶等。
(2)专家在实验中，需要用到聚乙二醇（PEG），其目的是 。
(3)农民种植杂交系马铃薯除可获得较高的收成外，还有什么优点？（写出两点）。
(4)运用此植物体细胞杂交法可使本来存在着生殖隔离的物种进行杂交，培育出兼有两物种品质的优良物种，最好用下列哪种方法？ （ ）
| A．单倍体育种法 | B．杂交育种法 | C．植物组织培养法 | D．花药离体培养法 |
现有甲、乙两种可能有一定毒性的化学物质，实验室研究人员欲通过动物细胞培养的方法来鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱。请你以一个研究人员的身份参与此项研究，完成下列实验报告并回答有关问题。
【实验原理】有毒物质能诱导细胞产生变异，根据这种变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。
【实验材料】活的小白鼠胚胎。
【药品用具】胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、培养瓶、恒温箱、载玻片、盖玻片、显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂各时期高倍显微照片。
【实验步骤】
（1）制备细胞悬浮液：把活的小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加入 处理，使胚胎组织分散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬浮液。
（2）进行细胞培养：
①取A、B、C三个洁净的培养瓶， ，加入等量的细胞悬浮液。
②向A培养瓶中加入化学物质甲，向B培养瓶中加入 ，向C瓶内加入等量的生理盐水，并将培养瓶摇匀。
③在实验中，C培养瓶起什么作用？ 。
（3）制作临时装片
①当细胞增殖到大约第8代左右时，同时从恒温箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞 ，再加入动物细胞固定液以便迅速杀死细胞并固定细胞。
②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬浮液，滴在与培养瓶有相同编号的载玻片的中央，用 染色，3～5 min后，盖上盖玻片。
（4）镜检和统计
把临时装片放在显微镜下，先用低倍镜后用高倍镜，寻找处于 期的细胞，并与C组对比以确认发生变异的细胞，同时统计 。
【结果与结论】
经研究人员实验得知：A、B、C三个培养瓶的Q值依次为：QA=1.3%、QB=12.5%、QC=0.1%，由此可知该实验的结论是 。
粤公网安备 44130202000953号
