以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，a－h为操作过程，请据图回答有关问题：
（1）图中数字标号代表的结构名称是
① ② ③
（2）d操作的名称是 ，要注意将内细胞团均等分割，否则会 若要对早期胚胎进行长期保存，应将其置于冷冻或液氮条件下。
（3）为了能确定目的基因已经导入到受精卵，相应的载体需要有 以便于进行检测。
（4）受体母牛必须和供体牛属于同一物种。移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是 。
下图是培养生产药物的乳腺生物反应器转基因动物的过程，请完成下列各题。
（1）①是含有人凝血因子Ⅸ基因的质粒,为了使凝血因子Ⅸ基因在羊恰当的细胞中表达，a片段应为羊 启动子，其是 识别和结合的位点。②中是根据 基因表达的性状筛选出的细胞。
（2）从白脸羊体内分离出的细胞要经过胰蛋白酶或 酶处理再进行培养，培养时要考虑 的环境；营养；温度、pH和 环境等外部条件。
（3）③表示 细胞，⑥表示的胚胎是 。
（4）⑥在受体母羊子宫内正常发育的生理基础是：第一，受体为胚胎提供正常发育的生理环境；第二，受体对移入子宫的胚胎基本不发生 反应；第三，供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系。
内皮素(ET)是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。ET主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合而发挥生物学效应。ETA是ET的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究以及拮抗剂的筛选、活性评价等奠定基础。其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为 ，限制酶XhoⅠ的识别序列为 。请分析回答：
（1）完成过程①需要加入缓冲液、原料、 和引物等，过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是 。
（2）过程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使 键断开，形成的黏性末端是 ；用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是 。
（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子的作用是 ，除图示结构外，完整的基因表达载体还应具有 等结构（至少写出两个结构）。
（4）过程⑥中，要用CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为处于容易吸收外界DNA的 的细胞。
（5）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是 。
下图表示某抗虫水稻主要培育流程。请据图分析回答问题：
（1）过程①需要的工具酶有 。过程②常用 溶液处理土壤农杆菌，使其成为感受态。
过程④依据的生物学原理是 。
（2）组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图
（图上标注了部分基因及部分限制酶作用位点）。请据图分析回答问题：
①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入 。
②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的 两个基因（用图中基因字母符号表示），以保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于 的准确插入。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。
③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，结果是在含 的培养基上能够生长。
（3）限制酶Ⅱ识别的核苷酸序列及切割位点为-G↓ACGTC-（“↓”表示切割位点），请在答题纸提供的双链上标出切割DNA分子后形成的黏性末端上的碱基 。
农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA插入到植物基因组中。图示为利用农杆菌培育转基因植物的基本流程，请据图作答：
（1）剪除Ti质粒的某些片段、替换复制原点O与添加抗生素的抗性基因T的过程①中，需用________处理DNA以防止DNA片段的自身环化，需用________“缝合”双链DNA片段的平末端。
（2）目的基因是指编码蛋白质的结构基因和一些_________。由过程②形成的运载体中，目的基因的首端具有________识别和结合的部位。
（3）过程③常用_______处理使农杆菌成为感受态细胞。在过程⑤⑥前，常采用________技术检测农杆菌和愈伤组织细胞中是否有目的基因及转录产物。
（4）过程④需对植物细胞做冲洗和_______处理，然后用_______去除细胞壁。
为治疗某种遗传性糖尿病，研究人员完成如下工作。
（1）图1中①是取自患者体细胞的________，过程②表示________技术。
（2）图1中过程③表示________技术，此过程需要用到的工具是________________。
（3）为检测胰岛样细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，研究人员分别控制甲、乙两组培养液中__________的浓度，将胰岛样细胞先后放在甲、乙两组培养液中，保温相同时间后检测胰岛素的分泌量。若诱导成功，则图2中甲组应为______________情况下测得的胰岛素分泌量，理由是_______________。
（选修三模块）人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗生产和抗体制备的流程如下图：
（1）过程①代表的是 ，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，其应该能被受体细胞的 所识别，以便于其转录。
（2）在将X进行扩大培养之前，至少需要经过两次筛选，方法分别是用 和 。
（3）以实验操作过程中用到的技术有 （至少写三个）。
（4）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是 。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 来制备疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的 与分离出的病毒进行特异性检测。
[生物——选修3：现代生物科技专题]
马铃薯是种植广泛的农作物，病毒侵染后导致产量大幅下降，培育脱毒和抗毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答下列问题：
（1）马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，经过人工培养获得脱毒苗。培养基中添加的生长素和细胞分裂素的作用是启动细胞进行有丝分裂，诱导离体细胞经过 、 完成组织培养过程，从而形成脱毒苗。为监控脱毒苗的质量，可采用 的方法检测病毒的基因，也可采用 的方法检测病毒的蛋白质。
（2）研究人员研究了茎尖外植体大小对苗的成苗率和脱毒率的影响，实验结果如图，实验结果表明，茎尖越小， ，因此马铃薯脱毒培养中茎尖外植体的适宜大小为 mm。
（3）若要通过转基因技术获得抗病毒的马铃薯植株，采用最多的方法是将病毒复制酶基因插入到 中Ti质粒的T-DNA上，构建了基因表达载体后，将其导入马铃薯受体细胞，筛选出成功转化的马铃薯细胞后，再通过 技术形成完整植株。
【生物-现代生物科技专题】
下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：
（1）在基因工程中，步骤第一步A表示__________，通过PCR技术可大量产生，PCR技术的原理是：_____，所用的酶是__________，B表示构建的基因表达载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及__________等。
（2）B→C为转基因绵羊的培育过程，其中②过程常用的方法是__________，使用的绵羊受体细胞为_____，④用到的生物技术主要有动物细胞培养和早期胚胎培养（或胚胎移植）。
（3）B→D为转基因抗虫棉的培育过程，其中③过程常用的方法是__________，要确定目的基因（抗虫基因）导入受体细胞后，在棉花细胞中是否成功表达，从分子水平上鉴定可以用采用的方法是_______________。
(12 分)我国科学家成功的将苏云金芽孢杆菌的虫基因导入棉花细胞中,培育的抗虫棉对棉铃虫等害虫毒杀效果高达80%〜100% 
(1)要确定抗虫基因导人棉花细胞后是整合到染色体DNA上，还是整合到细胞质DNA中,可选用______作为亲本进行______
(2)若某一个棉花受体细胞中导入并整合了两种抗虫基因,如图所示,将该细胞经组织培养培育成一株抗虫棉植株A,让该抗虫植株A自交,后代中抗虫植株出现的概率为______若该抗虫植株A与普通棉杂交得到F1,F1中抗虫植株与不抗虫植株的比例是：______。
(3)科学家们预言，即使是纯种"转基因抗虫棉”，独立种植若干代以后植株的抗虫能力也将下降。请简要分析可能的原因。
①__________________________________________；
②__________________________________________。
在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因A控制合成的抗冻蛋白A有较好的应用价值，通过转基因技术获得抗寒能力提高的植株。回答有关问题：
（1）从深海鱼提取和纯化DNA时，选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在不同NaCl溶液中 的特性，达到分离目的，加入一定量 可以进一步获得含杂质较少的DNA。
（2）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生 末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生 黏性末端的限制酶。
（3）为了检测A基因转录的mRNA是否翻译成抗冻蛋白A，需从转基因生物提取 ，用相应的抗体进行 。
（4）若要用动物细胞工程技术，制备抗A抗体的杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入 诱导细胞融合。细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有 ，体系中出现多种类型细胞的原因是 。
1981年Evans和Kaufman首次成功分离出小鼠胚胎干细胞(ES细胞)，医学界对其的研究虽颇有争议但也如火如荼。2008年1月17日《干细胞》杂志报道，美国加州的科学家使用了进行试管受精的年轻女性捐献的卵子去核，以及2名志愿者的皮肤成纤维细胞的细胞核，成功克隆出了5个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的干细胞。请回答下列问题。
(1)胚胎干细胞是从动物胚胎发育至囊胚期的________或胎儿的________中分离得到的一类细胞。
(2)上述过程中主要应用的动物细胞工程技术有____________、________。
(3)胚胎干细胞可诱导分化为皮肤干细胞，进而分化成皮肤细胞的根本原因是_____________________。
(4)某患者不能产生正常的白细胞，通过骨髓移植可以达到治疗的目的，骨髓移植治疗的实质是将________移植到患者体内。
(5)在培养胚胎干细胞时，培养基中通常需要加入______等天然成分，培养过程中所需气体主要有________。
(6)胚胎干细胞也可作为基因工程的受体细胞，将目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是________，将获得的目的基因转入胚胎干细胞前需构建基因表达载体，其目的是______________________。
科研人员向野生型拟南芥的核基因组中随机插入已知序列的Ds片段（含卡那霉素抗性基因），导致被插入基因突变，筛选得到突变体Y。因插入导致某一基因（基因A）的功能丧失，从突变体Y的表现型可以推测野生型基因A的功能。
（1）将突变体Y自交所结的种子用70%酒精_____ ___处理后，接种在含有卡那霉素的培养基中，适宜条件下光照培养。由于卡那霉素能引起野生型植物黄化，一段时间后若培养基上的幼苗颜色为绿色，则可确定植株DNA中含有______ __。
（2）统计培养基中突变体Y的自交后代，绿色幼苗3326株、黄色幼苗3544株，培养基中突变体Y的自交后代结果表明相关基因______ __（填“符合”或“不符合”）孟德尔自交实验的比例。
（3）研究人员进一步设计测交实验以检测突变体Y产生的__________ ____，实验内容及结果见下表。
| 测交亲本 |
实验结果 |
| 突变体Y（♀）×野生型（♂） |
绿色：黄色=1.03：1 |
| 突变体Y（♂）×野生型（♀） |
黄色 |
由实验结果可知，Ds片段插入引起的基因突变会导致____ __致死，进而推测基因A的功能与______ __有关。
（4）提取突变体Y的基因组DNA，限制酶切割后用_______ _连接，依据Ds片段的已知序列设计引物，扩增出_____ ____，进一步测定其序列。
HIV属于逆转录病毒，是艾滋病的病原体。回答下列问题：
（1）用基因工程方法制备HIV的某蛋白（目的蛋白）时，可先提取HIV中的 ，以其作为模板，在 的作用下合成 。获取该目的蛋白的基因，构建重组表达载体，随后导入受体细胞。
（2）从受体细胞中分离纯化出目的蛋白，该蛋白作为抗原注入机体后，刺激机体产生的可与此蛋白结合的相应分泌蛋白是 。该分泌蛋白可用于检测受试者血清中的HIV，检测的原理是 。
（3）已知某种菌导致的肺炎在健康人群中罕见，但是在艾滋病患者中却多发。引起这种现象的根本原因是HIV主要感染和破坏了患者的部分 细胞，降低了患者免疫系统的防卫功能。
（4）人的免疫系统有 癌细胞的功能，艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易发生恶性肿瘤。
2011年，美国科学家借助恒河猴的抗艾滋病毒基因对家猫DNA进行改造，同时利用荧光水母的基因培育出抗艾发光猫。以期找到治疗艾滋病的手段，具体培育流程如下图。请回答：
（1）题中基因工程的目的基因是______ _；如果培育的猫发出荧光，则可以确定抗艾滋病毒基因已经________。
（2）过程②常用的方法是_________，在过程③之前要对精子进行_______ __处理。受精过程防止多精入卵的两道屏障是_________ ____。
（3）图中抗艾荧光猫又称试管动物，其生殖方式属于___________，图中________（填数字）是试管动物技术的基本环节。
（4）若要在短时间内生产大量遗传组成相同的抗艾荧光猫，可采用的方法是_______，操作时要注意______。
（5）上述研究启示我们可以将恒河猴的抗艾滋病毒基因转入病人的某种细胞，经选择培养后输入患者体内，用于治疗艾滋病，这种方法称为_______ ____。
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