苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是培育转毒素蛋白基因植物及转基因植物中两种生物大分子合成的部分过程示意图。请据图回答问题:
(1)将图中①处的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后,反应管中有 种DNA片段。过程②需要用到 酶。
(2)假设图中质粒原来BamHⅠ的识别序列变为BclⅠ的识别序列,现用Bcl Ⅰ和HindⅢ切割质粒,再经过程②能否获得所需重组质粒? ,理由是 。
(3)若上述假设成立,并成功形成重组质粒,则重组质粒可被限制酶 切割。
(4)图中α链是 。不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点 (填“都相同”“都不同”或“不完全相同”),原因是 。
（共7分，每空1分）下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要：
本发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物“偏爱”的密码子来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰岛素—COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。请回答：
（1）本专利是采用________的方法获得目的基因的。获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列 ，原因是______________ ______。
（2）根据上述摘要，转基因操作时所用的载体是_______。构建的基因表达载体中不会含有________(从下列选项中选择)。
①目的基因 ②CaMV35S启动子 ③果实专一性启动子2A12 ④起始密码子 ⑤标记基因 ⑥内含子滞留序列 ⑦终止密码子 ⑧终止子
（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用________技术。该技术中使用的基因探针也可以用来检测__________________。
人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：
(1)过程①代表的是____________。
(2)过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和____________两种工具酶。由过程③构建A基因重组载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、__________________以及复制原点等。
(3)过程④要检测A基因是否进入受体细胞，常用的方法是________________法；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用________________法。
(4)与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是_____________ _______，并能大量制备。
(5)单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的______________和____________两大技术。
(6)单克隆抗体的制备过程中，两次筛选的目的不同，其中第二次筛选的目的是__________________。筛选时所用的培养基是特定的_____ ___培养基。
（现代生物技术15 分）阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家用农杆菌转化法培育出了转基因烟草。
资料乙：T4 溶菌酶在温度较高时容易失去活性。科学家对编码T4 溶菌酶的基因进行了改造，使其表达的T4 溶菌酶第3 位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97 位的半胱氨酸之间形成一个二硫键，提高了T4 溶菌酶的耐热性。
资料丙：植物甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小组拟培育同时含有A 和B 的新型药用植物。回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程范畴，将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用的方法是____________ 。构建基因表达载体常用的工具酶是____________ 和____________ 。在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是______________________________ 。
（2）资料乙中的技术属于____________ 工程的范畴，该工程是以分子生物学相关理论为基础，通过____________或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种____________ 的技术。在该实例中，引起T4 溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶的肽链的____________ 序列发生了改变。
（3）资料丙属于细胞工程范畴。为了培育该新型药用植物，可取甲和乙的叶片，先用酶去除细胞壁，再用化学诱导剂诱导二者融合，形成的融合细胞进一步培养形成完整的杂种植株。这种培育技术称为_________。这种杂种植株也可通过制作人工种子的方法来大量繁殖。经植物组织培养得到的____________________等材料用人工薄膜包装后可得到人工种子。
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，它们的识别序列和黏性末端各不相同。质粒同时也含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种变异属于________。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能________________________________。
(3)在构建重组质粒时，应选用________和________两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。
培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________、________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是________(填数字)菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用__________标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测，又要用______________的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______。
许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ′基因（内含EcoRI的酶切位点），其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal 和IPTG存在下，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞，过程如图所示。请据图回答：
（1）限制酶EcoRⅠ的识别序列和酶切位点是-G↓AATTC-，SmaⅠ的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-。图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是_____________。
（2）转化过程中，大肠杆菌应先用_____________处理，使其成为 细胞。
（3）菌落①②③中颜色为白色的是__________，原因是________________________________。
（4）菌落③中的目的基因是否表达，可采用的检测办法是_____________。
苎麻俗称“中国草”，苎麻纤维所制纺织品具有挺括凉爽、易洗快干、牢固舒适等特点，颇受国内外消费者青睐。
(1)苎麻的葡糖基转移酶基因(GT-like)指导合成β-葡糖基转移酶的过程包括转录和翻译两个基本阶段，其场所分别是_________和_________。β-葡糖基转移酶能催化纤维素合成，该酶能提高反应速率的机理是_________________。
(2)下图表示在适宜的光照、CO2浓度等条件下，苎麻在不同温度条件下的净光合作用速率和呼吸作用速率曲线。
①光合作用的光反应阶段产生的[H]和ATP用于暗反应中的__________________过程。光合作用和呼吸作用都受温度的影响，其中与_______作用有关的酶的最适温度更高。
②光合速率与呼吸速率相等时对应的温度是_____℃。在温度为40℃的条件下，该苎麻叶肉细胞叶绿体利用的CO2来源是_________________________________。
③若温度保持在20℃的条件下，长时间每天交替进行12h光照、12h黑暗，该苎麻能否正常生长？______，原因是_________________________________________。
(3)为解决苎麻纤维颜色单一和提高苎麻品质，科研人员 利用基因工程对苎麻进行了改良，其基本流程如下图。请分析回答下列问题：
①构建重组质粒时，需要用到_______________________________酶，质粒的③端会和切出的目的基因的_________端 (填①或②) 相连接。
②苎麻茎尖细胞通过________________(填生物技术名称)获得完整植株的过程，有力地证明了即使高度分化的细胞仍具有_________性。
马铃薯是种植广泛的农作物，病毒侵染后导致产量大幅下降，培育脱毒和抗毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答：
（1）马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，经过人工培养获得脱毒苗。培养基中添加的生长素和细胞分裂素的作用是启动细胞进行 ，诱导离体细胞经过 完成组织培养过程，从而形成脱毒苗。为监控脱毒苗的质量，可采用 的方法检测病毒的基因，也可采用 的方法检测病毒的蛋白质。
（2）研究人员研究了茎尖外植体大小上对成苗率和脱毒率的影响，实验结果如图。实验结果表明，茎尖越小， ，因此马铃薯脱毒培养中茎尖外植体的适宜大小为 ，选择理由是 。
（3）若要通过转基因技术获得抗病毒的马铃薯植株，采用最多的方法是将病毒复制酶基因插入到 中Ti质粒的 上，构建出 后，将其导入马铃薯受体细胞，筛选出成功转化的马铃薯细胞后，再通过 技术形成完整植株。
下图是培育能产生凝血因子牛的过程示意图，试回答相关问题：
（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是 ；从良种公牛采集的精子需 后才能进行受精作用。
（2）在过程③中，当一个精子进入卵细胞后会激发卵子发生反应，如透明带反应等，其意义是 。
（3）研制能够产生人凝血因子的牛乳腺生物反应器，需将目的基因导入牛受精卵，过程④最常用的导入方法是 ；获得转基因母牛后，如果 即说明目的基因已经表达。
（4）过程⑥涉及的技术是
(5)同期发情处理的方法是 ，冲卵中的“卵”是指 。
阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。
回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程的范畴。构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______ (相同、不同)黏性末端的限制酶。
（2）构建的表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_________。将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用______法。
（3）资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴。鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与______融合，形成______细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于______，可大量制备。
（4）与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用______诱导融合。
(1)科学家将外源基因导入绵羊的受精卵中，常用的方法是____________。由于外源基因可能随机插入到受精卵的DNA中，因而有时会导致早期胚胎死亡，最可能原因是
______________________________________________________________________。
(2)从早期胚胎或原始性腺分离出来的一类体积小、核大具有发育的全能性的细胞是__________。
(3)若要获得遗传物质完全相同的两个新个体，可对发育到桑椹期或囊胚期阶段的早期胚胎进行______________处理，经过“最后一道工序”________________，植入到受体母绵羊体内。
(4)我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉、抗虫水稻等研究，可以减少农药、杀虫剂的使用，这将对____________________起到重要作用。生态工程所遵循的基本原理有物质循环再生、整体性、________________、________________及系统学和工程学原理等原理。
加利福尼亚大学的一组科学家通过基因工程技术成功地将萤火虫的荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内。
（1）在基因工程中，获得目的基因通常有两种途径，在此基因工程中，获得目的基因最可能的途径是 ，在此过程中需要使用 和 酶。
（2）将目的基因导入大肠杆菌需要运载体的帮助。作为运载体需具备的条件有 。
| A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存 |
| B．具有特定的限制酶切点 |
| C．具有与目的基因相同的碱基片断 |
| D．具有某些标记基因 |
（3）培育能发荧光的植物是生物工程学家的美好愿望之一。如果利用基因工程技术将荧光素酶基因成功导入植物细胞，并能够表达，请问如何才能培育成能发荧光的植物幼苗？简述培育过程。
继哺乳动物乳腺发生器研发成功后，膀胱生物发生器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是___________。
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入___________中，原因是_____________
_____________________________________。
（3）通常采用_____________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的__________细胞中特异表达，所以一般在基因表达载体中插入特异性表达的启动子，另外该基因表达载体中还应含有________________、______________、________________。
下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛索）的过程设计图解，请回答：
(1)此种治疗方法应属于____治疗。
(2)图中③、④所示的生物工程技术分别是____和____。上图呈现的过程还应用了____、____（至步答两种）生物工程技术手段。
(3)图中①、②所示的结构分别是____、____。
(4)过程③通常用去卵细胞作受体细胞的原因除了它体积大、易操作外，还因为_______；过程④通常用②做受体细胞的原因是________;过程④的完成需要用到的基因操作工具有____。
(5)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是____。
(6)除图中所用的方法外，治疗遗传性糖尿病的方法还有____。
人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用_______ __切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用____ ___技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_______。采集的精子需要经过______，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。
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