下图表示应用现代生物技术制备甲型H1N5病毒抗体的设想，请回答下列问题：
（1）在培育转甲型H1N5病毒抗体基因奶牛的过程中，①过程是__________________
________ __，这是基因工程中最关键的步骤。
（2）转甲型H1N5病毒抗体基因奶牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N5病毒抗体，③过程需将受精卵培养到______________________________时期再植入母体。
（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，筛选出的Ⅱ细胞才既能______________________又能产生____________________。
（4）制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术。细胞融合常用的诱导剂是____________________________________。
请回答胚胎工程和基因工程方面的问题:
(1)应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、 、 以及在母体中发育和产出等过程。
(2)在“试管牛”的培育过程中,要使精子和卵母细胞在体外成功结合,需要对精子进行处理,使其 。另外,培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期,该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和 。
(3)通常奶牛每次排出一枚卵母细胞,采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞,常使用的激素是 。
(4)利用基因工程可以获得转基因牛,从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是 、 基因表达载体的构建、 和 。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素,则所构建的基因表达载体必须包括:某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、 、 、 和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是 (显微注射法、农杆菌转化法),为获得能大量产生人干扰素的转基因牛,该基因表达载体应导入的受体细胞是 (受精卵、乳腺细胞)。
下图表示两种限制性核酸内切酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA进行切割的示意图，请回答以下问题：
(1)图中甲和乙代表__________________________________________。
(2)EcoRⅠ、HpaⅠ代表_______________________________________。
(3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为________、________。甲中限制酶的切点是________之间，乙中限制酶的切点是________之间。
(4)由图解可以看出，限制酶的作用特点是：
_______________________________________________________________________。
根据下面植物体细胞杂交技术流程图，回答相关问题。
（1）若运用传统有性杂交(即用番茄、马铃薯杂交)能否得到杂种植株？为什么？
__________________________________________________________________。
（2）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，运用的技术手段是________，依据的原理是____________，其中过程②称为_____________，与过程③密切相关的具有单层膜结构的细胞器为____________，过程④相当于_______________，⑤过程涉及的分裂方式为________________。
（3）已知番茄、马铃薯分别为四倍体、二倍体，则“番茄—马铃薯”属于________倍体植株。
（4）随“神六”太空旅行的种苗中，最受关注的是柴油树试管苗。柴油树种子含有的柴油是植物细胞的代谢产物，可用植物组织培养来实现柴油的工业化生产。若利用此技术，将柴油树细胞培养进行到_______过程即可(填字母)。
（5）若培育抗虫棉，将抗虫基因通过适当的途径导入棉花受精卵，然后进行组织培养，该过程相当于________(填编号)。
（6）人工种子又称合成种子或种子类似物，它是20世纪生物技术在农业上的应用之一。由发育到_____过程(填字母编号)的结构包裹上________可制备人工种子。
基础知识填空：
⑴目的基因导入植物细胞的方法除了农杆菌转化法，还有 法和 法。
⑵目前采用 技术来进行作物脱毒，其原理是植物 附近病毒极少，甚至无病毒，操作过程需要在无菌条件下进行以防止 。
⑶动物细胞培养与早期胚胎培养时，除了必需的营养成分外，通常都需要在培养液中添加 ，以促进细胞的生长和增殖。
⑷早期胚胎发育过程中：桑椹胚阶段之前的每一个细胞都属于 细胞；囊胚期的 细胞，将来发育成胎儿的各种组织；原肠胚时期出现 分化。
⑸ES细胞在 细胞上，或在添加抑制因子的培养液中，能维持不分化状态。
⑹为了实现可持续发展，人类的经济发展必须走生态经济之路，生态经济主要实行循环经济的原则，而实现“循环经济”最重要的手段之一是 。
某竹芋科植物果实中含有一种甜蛋白，其甜度为蔗糖的三千倍，是理想的甜味剂。某研究小组试图把甜蛋白基因(目的基因)导入黄瓜中，以改良这种黄瓜的品质。获得转基因黄瓜植株的流程图如下，请回答：
(1)通过步骤①和②可人工合成目的基因，在步骤②中先以mRNA为模板在______
酶的作用下合成互补DNA，然后通过一系列实验从中筛选出 基因。此外，还可以根据甜蛋白的氨基酸序列推测出 序列，再用 合成。
(2)通过 技术，可以获得大量目的基因。利用该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成 。
(3)导入了目的基因的叶片组织细胞经过步骤③ 和④_______
后形成了完整的植株，说明 。
(4)可以通过 技术检测黄瓜植株中是否含有甜蛋白。
(共12分)阅读如下材料：
材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。
材料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。
材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。
回答下列问题：
（1）材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用 法。构建基因表达载体常用的工具酶有 和 。在培育转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是 。
（2）材料乙属于 工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对 进行改造，或制造一种 的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的 序列发生了改变。
（3）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的，生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为 体，兔乙称为 体。
某研究小组欲将已知抗盐基因导人原生质体培育抗盐菊科植物。请回答：
（1）为获得大量抗盐基因，可通过 技术进行扩增，也可将其连接到 上，通过大肠杆菌培养扩增。
（2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体 。酶混合液需通过 灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在 中进行。
（3）可通过 方法，直接将抗盐基因导入原生质体的细胞核。此外，还可用聚乙二醇融合、电击等方法导入。导入后的原生质体需再生出 ，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖。
（4）利用带有标记的抗盐基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行 ，验证抗盐基因是否被整合到受体的细胞中并转录。通过将扩大繁殖的再生植株转接到含有 的培养基，根据生长状况初步筛选出抗盐植株。
（5）为了获得大量该转基因植株，可将带腋芽的茎段转入适宜培养基中，获得大量 ，然后转入生根培养基中诱导生根，形成再生植株。再生植株需进行 （不定项选择：
| A．无菌处理 |
| B．锻炼 |
| C．去除根部残留的培养基 |
| D．逐步提高湿度处理）后才能移种大田。 |
通过胚胎工程建立的转基因动物模型，常用于基因表达调控的研究、良种动物的筛选以及基因药物的生产等。制备转基因鼠的流程如图所示：
（1）体外受精时，人工采集的动物精子必须经过____________处理才能完成图示中的①过程，完成②过程常采用的方法是______________________。
（2）④过程中，为维持培养液pH的相对稳定，必须将培养瓶放置在__________中进行培养，培养过程中用______________酶处理才能获得单个细胞。
（3）图示中甲为____________________时期的去核卵母细胞，⑤过程操作技术叫做_________。
（4）在上述转基因鼠的培养过程中，所用到的主要胚胎工程技术有体外受精、早期胚胎培养和_____________。
（5）转基因鼠只携带一个B基因，常采用___________的方法培育出基因型为BB的个体。
端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，由DNA重复序列和结合蛋白组成。研究发现，随细胞不断增殖，端粒逐渐缩短。当细胞端粒缩至一定程度时，细胞停止分裂。端粒酶由RNA和蛋白质组成，其中RNA是一段模板序列，可指导合成端粒DNA的重复序列。人体内大多数癌细胞都表现出较高的端粒酶活性。请分析回答：
（1）端粒酶的作用相当于HIV病毒中的 酶。结合端粒酶的作用推测，癌细胞表现出恶性增殖而不衰老死亡的特点可能是由于 。
（2）和端粒酶的化学成分最接近的细胞器是_______。
A、线粒体 B、核糖体 C、中心体 D、内质网 E、高尔基体 F、溶酶体
（3）双歧杆菌是人体肠道内的自然菌群，具有抗肿瘤作用。研究人员从双歧杆菌中提取出双歧杆菌脂磷壁酸（LTA），加入细胞培养液中培养人白血病细胞株HL-60，检测LTA对细胞增殖的影响。LTA浓度和实验结果如图1所示。
①此实验中还有一组对照实验，其处理是_________________。
②选用LTA浓度为40μg/ml的培养液中培养的细胞，测定端粒酶活性，结果如图2所示。综合两个实验结果，可以得出的结论有：
结论一：LTA能通过_______________来抑制_______________。
结论二：______________。
结论三：______________。
如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0．7Kb）、PvuⅠ（0．8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1kb=1000个碱基对，请回答下列问题：
（1）片段D为目的基因中的某一片段，则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位依次是______________（填数字）。
（2）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是______________ （填A/B/C），请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________、______________。
（3）用EcoR I完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为1．1kb和______________kb的两个片段，或者长度分别为______________的两个片段。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
（4）将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，之后，受体细胞的类型（对抗生素表现出抗性R或敏感性S，蓝白代表菌落颜色）包含______________ （多选）。
A．ApR、蓝色 B．ApR、白色 C．ApS、蓝色 D．ApS、白色
（5）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是_____________。
A．受精卵能使目的基因高效表达
B．受精卵可发育成动物个体
C．受精卵基因组更易接受DNA的插入
D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值。右图所示是获得转基因莴苣的技术流程，请据图回答下列问题：
（1）获取目的基因的主要途径包括从自然界已有的物种中分离和________。
（2）①过程需要的酶有________、________。
（3）重组质粒除了带有抗冻蛋白基因afp以外，还必须含有启动子、终止子和________，这样才能构成一个完整的基因表达载体。
（4）如果受体细胞C1是土壤农杆菌，则将目的基因导入它的目的是利用农杆菌的________，使目的基因进入受体细胞C2，并将其插入到受体细胞C2中________上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达，形成转基因莴苣。经②过程获得的转基因莴苣中的目的基因是否表达，在分子水平上可用________法进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因莴苣培育成功。
下图表示应用现代生物技术制备H7N9病毒单克隆抗体的流程。回答下列问题：
（1）①过程表示______________；②过程用到的工具酶是________________。
（2）构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有 ，以利于目的基因的表达。③过程常用的方法是 。
（3）从分子水平上鉴定目的基因是否转录可采用_____________技术。
（4）细胞Ⅱ的特点是 。
（5）若要预防H7N9禽流感，可用图中的________________作为疫苗。
（6）传统农业中，植物秸秆往往是通过焚烧以便使其中的无机盐还田，该做法的最大缺点是会造成环境污染；而现代农业中，在充分利用能量、减少环境污染的同时，通过饲养家禽、家畜，提高农民经济收入，使保护环境和发展经济相互协调，这主要体现了生态工程的________________原理。
以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，请据图回答下列有关问题：
（1）图中对良种奶牛进行处理时用到的激素是 ，②过程使用的是 酶。③表示 技术，
（2）如果转基因牛D的牛奶中含有 ，则说明血清蛋白基因在个体水平已表达成功，其他细胞中不含血清蛋白是 的结果。
（3）图中A和B分别是指 和 。
分）绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光下发出荧光，基因工程中，GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：
（1）基因工程中，GFP基因属于 ，获取该基因的工具酶是 。
（2）构建基因表达载体的目的是 。
（3）过程②常用的方法是 ，在进行过程④前，利用 技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。
（4）胚胎工程的最后一道工序是 ，进行④过程的优势是 。
（5）绿色荧光小鼠培育过程涉及的生物技术有 （至少回答两点）。
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