长期以来，优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机，请据图完成下列问题：
（1）在试管牛和克隆羊的培育过程中都必须用到的生物技术有 、 。
（2）和受精有关的过程有：①第一次卵裂开始；②释放第二极体；③顶体反应；④穿越透明带；⑤雌、雄原核的形成；⑥核膜消失，雌、雄原核融合。
其正确的顺序为 （填序号）。
（3）超数排卵技术的处理措施是对供体母牛注射 ；冲卵实质上是用特定装置，将供体母牛子宫内的 冲洗出来。
（4）从A到E中，适宜于牛的胚胎移植时期有 ；图中标号3为 ，它将来可发育为胎膜和胚盘。
（5）动物的早期胚胎移植到同种且 与供体相同的动物体内，使之继续发育为新个体的技术叫做胚胎移植。用某染料鉴定胚胎细胞是否为活细胞时，发现活胚胎细胞不能被染色，其原因是活细胞膜 。
（6）试管牛E的性别为 ，克隆羊多利的性状和 (黑面绵羊\白面绵羊）最接近。
(7)从哺乳动物早期胚胎或原始性腺中分离出来的细胞，称为ES或EK细胞。这类细胞的形态特征有
某正常夫妻生下的一个血友病男孩，不幸在一次意外中大量失血死亡。该夫妻想借助试管婴儿技术再生一个健康孩子。请结合你所学的知识帮他们解决有关问题：
（1）试管动物技术是指：通过人工操作使卵子和精子在体外条件下 ，并通过培养发育为___________后，再经移植产生后代的技术。
（2）人类精子是 在睾丸内形成的，从 期开始，直到生殖机能减退，而女性卵泡的形成和在卵巢内的储备，是在 （时期）完成的，这是精子和卵子发生上的重要区别
（3）在体外受精时，精子首先要进行 处理，雌性排卵是指 卵子受精的标志是指
（4）人的体外受精胚胎，在8-16个细胞阶段可以取出向受体移植，也可以 。
（5）你建议这对夫妇选择 性胎儿，这需要在胚胎移植前取1-2个细胞观察 或做DNA分析来做性别鉴定
2012年诺贝尔生理学或医学奖获得者约翰·格登和山中伸弥在“体细胞重编程技术”领域做出了革命性贡献。请回答下列问题：
（1）约翰·格登通过实验把蝌蚪已分化体细胞的 移植 进入卵母细胞质中，并成功培育出“克隆青蛙”。在这个过程中用到的胚胎工程技术有 和 。
（2）山中伸弥将4个关键基因通过逆转录病毒转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞，即iPS细胞。在该技术中，逆转录病毒是这4个关键基因进入成纤维细胞的 ，它能够携带外源基因进入受体细胞，并整合到其染色体 上。
（3）iPS细胞与胚胎干细胞一样，具有发育的 ，即可以分化为成年动物体内任何一种组织细胞。
（4）获得的iPS细胞可能用于治疗人类的某些顽症，请试举一例： ；还可能培育出人造器官，解决目前临床上存在的供体器官不足和器官移植后 的问题。
下图是治疗性克隆的过程图解。请回答相关问题：
（1）胚胎干细胞，简称ES细胞。ES细胞主要是从早期胚胎细胞或胎儿的 中分离出来的一类细胞。
（2）“治疗性克隆”过程中的最组新细胞如果培养后移植到子宫内能够成功孕育出一个新个体，则称作 克隆，我国政府对其的态度是 。相比较而言，试管婴儿的产生过程中，在“试管”内完成的步骤为体外受精和 。受精前精子可通过培养法或 法获能，然后与培养至 期的卵子在获能培养液小滴内完成受精，是否受精的标志是 。自然条件下，受精是在雌性的 内完成的。
（3）相同的胚胎于细胞，分化的结果各种各样，其原因是 。对白血病患者通过“治疗性克隆”的技术进行造血干细胞移植能够在一定程度上解决移植过程中的 反应和供体细胞来源不足等问题
I. (13分)人类Y染色体虽有强烈的男性化作用， 但其作用不是绝对的。有些XY型个体体内有睾丸，但其体型与外生殖器的表现型却为女性，称为“睾丸女性化”。 通过研究发现“睾丸女性化”是X染色体上某一基因突变 引起的遗传病(等位基因用T、t表示）。下图为“睾丸女性化”患者的一个家系，据图请回答下列问题：
(1) 根据系谱图中______个体的表现型可判断“睾丸女性化”为______ (填“显性”或“隐性”)遗传病。
(2) I1和II1个体的基因型依次为______、______；理论上I1和I2所生子女的性别表现及比例为____________o
(3) 若IV1与正常男性婚配，其所生子女中出现“睾丸女性化”患者的概率为______。
(4) 研究表明T基因编码睾丸酮受体蛋白，t基因无此项编码功能，睾丸酮决定男性第二性征的 出现，试从分子水平解释“睾丸女性化”的病因______
(5) “睾丸女性化”遗传病的研究表明人类第二性征出现的根本原因是与______有关。
II. O分)为了研究高血压的患病机理，某科研机构将通过逆转录方法获得的高血压相关基因 转移到大鼠体内，具体流程如下图所示，请据图分析回答下列问题：
（1）要用同一种______处理高血压相关基因和质粒，以获得相同的______。质粒作为运载体，其基因结构中高血压相关基因的首端必须有______；质粒还必须具有______，以检测重组质粒是否导人了受体细胞；图示过程中，高血压相关基因导入受体细胞一般采用的方法是____________。
（2）将受精卵发育成的早期胚胎通过______技术转移到代孕母体的子宫内孕育成转基因大鼠，此前需要用激素对代孕母体进行______处理。
（3）检测髙血压相关基因是否表达的方法有分子水平的检测和个体水平的检测，分子水平的检 测方法是______，个体水平的检测方法是______。
下图是培养生产药物的乳腺生物反应器转基因动物的过程，请完成下列各题。
（1）研究表明，在共转染中，能够摄入DNA的哺乳动物细胞，可将两种互不相连的质粒能以很高的频率(>90%)摄入细胞。由此可以认为，图中共转染过程能够将 基因和目的基因同时导入同一个细胞。②中是根据 基因表达的性状筛选出的细胞。
（2）①是含有人凝血因子Ⅸ基因的质粒，在基因工程中该分子依据所起到作用被称为 。为了使凝血因子Ⅸ基因在羊恰当的细胞中表达，a片段应为羊 启动子，其是 识别和结合的位点。
（3）从白脸羊体内分离出的细胞要经过胰蛋白酶或 酶处理再进行培养，培养时要考虑 的环境；营养；温度、pH和 环境等外部条件。
（4）③表示 细胞，⑥表示的胚胎是 。图中电激的作用是促进 。
（5）⑥在受体母羊子宫内正常发育的生理基础是：第一，受体为胚胎提供正常发育的生理环境；第二，受体对移入子宫的胚胎基本上不发生 反应；第三，供体胚胎可与受体子宫建立正常的 联系。
据报道，英国两支科研团队已经培养出首批“临床级”(高纯度)人类胚胎干细胞系，该研究有助于科学家能更快为失明、严重损伤或心脏病等找到新的干细胞疗法。请回答下列与胚胎干细胞有关的问题：
（1）胚胎干细胞是从动物胚胎发育至 期的内细胞团或胎儿的 分离得到的一类细胞。如果是从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞，在培养过程中，必须用 处理内细胞团，使之分散成单个细胞。
（2）体外培养胚胎干细胞时，通常要加入 等天然成分，早期胚胎发育在 阶段以前是全能细胞。在培养胚胎干细胞时，培养液中加抗生素的目的是 ，且还要置于5％的CO2气体环境中，CO2的作用是 。
（3）胚胎干细胞可作为培养转基因动物的受体细胞，目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是 。检测目的基因是否插入受体细胞的DNA中，可采用 技术。
（4）利用干细胞疗法治疗瘫痪是将干细胞移植入患者体内，通过服用 诱导因子，诱导胚胎干细胞分化出神经细胞，来代替或修复损伤和死亡的神经细胞，达到治疗疾病的目的。
据图回答下列问题：
(1)对供体母牛、受体母牛进行的①处理是 。
(2)在哺乳动物的受精过程中，防止多个精子入卵受精的过程有 。
(3)在输卵管内，次级卵母细胞的减数第二次分裂是在 过程中完成的。判断卵子是否受精的重要标志是 。
(4)冲卵之后要进行 ，此时胚胎应发育到桑椹胚或囊胚阶段。
(5)在胚胎工程中运用 和 等技术获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。
（6）若预期蛋白质欲通过乳腺生物反应器生产，要对精子进行筛选，保留含性染色体为 的精子。
“滔滔”是我国第一例转入人体白蛋白基因的转基因试管牛，人们利用该转基因奶牛的乳汁生产人类血清白蛋白。
（1）试管动物实际上是体外受精与胚胎移植两项技术的综合运用。体外受精前需要对奶牛的精子进行_________处理。防止多精入卵的生理反应包括 和 。胚胎工程的终端环节是胚胎移植，移植后的胚胎能在受体子宫内存活的生理基础是不发生______________________________。
（2）人体白蛋白基因通常可以从基因文库中获取，含有一种生物所有基因的文库称为____________，获得人体白蛋白基因后可以利用________技术进行扩增。人体白蛋白基因一般利用____________技术导入牛的受精卵中，当受精卵分裂到囊胚期时，需要取囊胚的____________细胞进行性别鉴定，以确保发育成熟的牛能分泌乳汁。
（3）基因工程技术还可以让动物细胞生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的B细胞的抗体分子基因敲除，导入人的抗体分子基因，然后将该细胞与 细胞融合，再用特定的 进行筛选得到杂交瘤细胞，再通过克隆化培养和_______________等过程获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体。
下图表示利用胚胎干细胞(ES细胞)所作的一系列研究，请据图分析回答。
(1)上图中的胚胎干细胞（ES细胞）可以 从______和______中分离获取。
(2) 过程I将胚胎干细胞置于y射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上，并加入动物 血清、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的______，加入抗生素是为了______。该过程对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。
(3) 过程II将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的襄胚腔，通过组织化学染色，用 于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有 ______的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是____________。
(4) 过程III是培育转基因小鼠，将获得的目的基因导人胚胎干细胞之前需构建基因表达 载体，目的是______。将构建好的表达载体导入胚胎干细胞最常用的方法是______。
(5) 过程IV得到的小鼠畸胎瘤中里面全是软骨、神经管、横纹肌和骨骼等人类组织和器官。实验时，必须去除小鼠的胸腺，使其存在免疫缺陷，其目的是______，该过 程 研 究 的 意义在于解决____________问题。
(6) 该研究中，包含的生物技术有______(至少写出两种）。
降钙素是一种多肽类 激素，临床上用于治疗骨质疏松症等疾病。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条各72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。
在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：
(1)Klenow酶是一种_________酶，获取新型降钙素目的基因的方法是______________________。
(2)获得的双链DNA经EcoR I（识别序列和切割位点．-G↓LAATTC-）和BamH I（识别序列和切割位点．-G↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它___________。若选择动物乳房反应器生产新型降钙素，则应将重组DNA导入__________细胞，成功后利用胚胎工程，先进行早期胚胎培养，最后通过______________，即可获得转基因动物。
②设计EcoR I和BamH I双酶切的目的是__________________________。
③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有 __________________________________。
(3)制备该新型降钙素，运用的是现代生物工程技术中的_________________工程。
2012年诺贝尔生理学或医学奖授予两位在细胞核重编程领域有重大贡献的科学家。科学家把c–Myc等4个关键基因通过逆转录病毒载体转入小鼠的成纤维细胞，使其变成诱导多能干细胞——iPS细胞，这意味着未成熟的细胞能够发展成所有类型的细胞。
（1）基因工程中经常使用的工具酶是___________、常用的载体除了动植物病毒外还有________和______。
（2）若想增强载体病毒颗粒的感染性，可利用__________技术改造病毒外壳蛋白，直接对__________进行操作。
（3）应用__________技术得到重组细胞，激活重组细胞发育成早期胚胎，使用从__________中获得的胚胎干细胞，在培养中根据需要加入相应的小分子物质以促进其__________得到各种组织器官，用于治疗某些疾病，这种技术称为____________________。
（4）iPS细胞的获得不使用胚胎细胞或卵细胞，也不诱导发育成个体，因此不会像生殖性克隆一样引发__________问题。
（5）iPS细胞在体外已成功地被诱导分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，究其本质原因是基因____________________的结果。
2009年，H1N1病毒肆虐全球，使数以亿计的人患上了甲型H1N1流感，我国政府和科研人员通力合作，很快便研制生产出了甲型H1N1流感疫苗，并且为广大师生免费接种了疫苗。甲型H1N 1流感病毒和以往的流感病毒一样为RNA病毒。请据此流程图回答下列问题：
（1）流程图中涉及到的生物工程技术有[①]基因的剪切拼接技术、[ ]________、[ ]________。
（2）在将抗原决定基因注入奶牛受精卵前，须先将其进行人工改造，也就是给其接上_______和______，否则它不能表达；然后再与运载体结合，才能进行显微注射。
（3）为获得产奶的奶牛，在进行③过程前，要对胚胎进行________,此项技术通常要选用囊胚期的 细胞。
（4）如对扩增出的DNA进行鉴定，可采用的试剂是 ，在沸水浴条件下出现 颜色反应，则为DNA。
《时代》杂志评出的2007年十大科学发现中指出，美国及日本两个研究团队的报告中证实皮肤细胞经过“基因直接重组”后可以转化成为具有胚胎干细胞特性的细胞。请回答下面有关胚胎工程的若干问题。
（1）在胚胎发育中，根据胚胎形态的变化，可将早期发育的胚胎分为 、 、 三个阶段。
（2）胚胎工程中的胚胎移植实际上是生产胚胎的 和孕育胚胎的 共同繁殖后代的过程。胚胎移植能否成功，与供受体的生理状况有关： ，为胚胎的收集提供了可能； ，为胚胎在受体内的存活提供了可能；而且供体胚胎可与受体子宫建立正常的 ，但移入受体的胚胎的遗传特性不受任何影响。
（3）哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞，是由 分离出来的一类细胞。美日科学家的研究过程是利用病毒分别将四个基因送入皮肤细胞，促使普通的皮肤细胞产生变化，最后成为带有 性质的细胞，称为诱导式多能性干细胞（iPS）。在基因工程中，这四个基因称为 ，所利用的病毒称为 。 与借助胚胎提取胚胎干细胞比较，这样获得的干细胞的研究，其最大突破就是在不破坏胚胎的前提下提取可以复制成器官或组织的细胞，不仅避开了长期以来有关生物技术的 方面的争议，也使其来源更加广泛而方便。
阅读如下材料：
材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在，得到了体型巨大的“超级小鼠”；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。
材料乙：T4溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码T4溶菌酶的基因进行改造，使其表达的T4溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了T4溶菌酶的耐热性。
材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。
回答下列问题：
（1）材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用 法。构建基因表达载体常用的工具酶有 和 。在培育转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是 。
（2）材料乙属于 工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对 进行改造，或制造一种 的技术。在该实例中，引起T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的 序列发生了改变。
（3）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到 种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为 体，兔乙称为 体。
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