【生物-现代生物科技专题】
是一种神经营养因子。对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究。请回答:
(1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中,使用胰蛋白酶的目的是。
(2)构建含基因的表达载体时,需选择图1中的限制酶进行酶切。
(3)经酶切后的载体和基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有三种:单个载体自连、基因与载体正向连接、基因与载体反向连接(如图1所示)。为鉴定这3种连接方式,选择酶和酶对筛选的载体进行双酶切,并对酶切后的片段进行电泳分析,结果如图2所示。图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
(4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测基因是否成功表达,可用相应的与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定的密度时,需进行培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验。