下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备"工程菌"的示意图。

请据图回答：
⑴获得$A$有两条途径：一是以$A$的$mRNA$为模板，在酶的催化下，合成互补的单链$DNA$，然后在作用下合成双链$DNA$，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出响应的$mRNA$序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其$DNA$的序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用$PCR$技术扩增$DNA$时，需要在反应体系中添加的有机物质有、、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的$DNA$聚合酶，扩增过程可以在$PCR$扩增仪中完成。
⑶由$A$和载体$B$拼接形成的$C$通常称为。
⑷在基因工程中，常用$C{a}^{2+}$处理D，其目的是。