受损伤的马铃薯细胞内酚氧化酶(PPO)和底物(酚类物质)直接接触,引起马铃薯的褐变,为探究温度对PPO活性的影响,实验小组进行如下实验:
(1)PPO粗提液的提取
低温下将新鲜马铃薯用蒸馏水洗净、去皮,取20g样品放入含50mL磷酸缓冲液(PH值为5.5)的研钵中,同时加入少量石英砂,研磨、离心、上清液即为PPO的粗提液,加缓冲液研磨的目的是
(2)不同温度下PPO活性的测定
步骤顺序 |
试管1 |
试管2 |
试管3 |
试管4 |
试管5 |
试管61 |
试管7 |
试管8 |
PPO粗提液 |
2mL |
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2mL |
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2mL |
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2mL |
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酚类底物 |
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2mL |
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2mL |
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2mL |
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2mL |
反应 |
混合振荡 |
混合振荡 |
混合振荡 |
混合振荡 |
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温度预处理(5min) |
0℃ |
15℃ |
30℃ |
45℃ |
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保温时间 |
5min |
5min |
5min |
5min |
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记录结果 |
+ |
++++ |
++++ |
++ |
(注:反应底物充足;实验结果中“+”越多褐色越深)
①实验步骤顺序有不妥之处,请改正 。
②实验结果表明:15℃和30℃温度条件,PPO具有相同的活性,从酶的特性分析其原因是 。
③为进一步探究PPO最适温度,应在 范围内设置温度梯度。