下表中列出了几种限制酶识别序列及其割位点,图一、图二中箭头表示相关限制酶的位点。请回答下列问题:
限制酶
|
BamH I
|
Hind Ⅲ
|
EcoR I
|
Sma I
|
识别序列及切割位点
|
↓ GGATCC CCTAGG ↑
|
↓ AAGCTT TTCGAA ↑
|
↓ GAATTC CTTAAG ↑
|
↓ CCCGGG GGGCCC ↑
|
(1) 一个图一所示的质粒分子经Sma I切割前后,分别含有___________个游离的磷酸基团。
(2) 若对图一中质粒进行改造,插入Sma I 酶切位点越多,质粒的稳定性越_____________。
(3) 用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用Sma I切割,原因是____________。
(4) 与只是用EcoR I 相比较,使用BamH I和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止___________。
(5) 为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入_______________。
(6) 重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_____________。
(7) 为了从cDNA 文库中分离获取蔗糖转基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖的能力的大肠杆菌突变体,然后在________________的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。
(8)若将某一目的基因转入某一植物的核基因组中,确定该目的基因是否已整合到某一染色体上,方法之一是测定该染色体的___________________。