野生型大肠杆菌(E.coli)具有完整的LacZ基因,该基因编码的β-半乳糖苷酶由α片段和ω片段两部分组成,两部分均存在时可将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝,从而使整个菌落变为蓝色。DH5α是基因工程中常用的一种大肠杆菌诱变菌株,对氨苄青霉素敏感,其LacZ基因中编码ω片段的序列仍然保留,但编码α片段的序列缺失。
(1)根据中心法则,LacZ基因控制β-半乳糖苷酶合成的过程主要包括_____和______两个环节。
(2)某研究小组构建了质粒pXY-1,如图甲所示,该质粒含氨苄青霉素抗性基因Ampr和编码大肠杆菌β-半
乳糖苷酶α片段的基因片段LacZ’。图乙显示的则是Nae I、Hpa II和Kas I三种限制性内切酶的识别序
列(
表示切割位点)。
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若以该质粒作为运载体,将外源目的基因(图丙)导入大肠杆菌DH5α菌株,在构建重组质粒时应选用的限制性内切酶是______。此外,还需用到的另一种酶是______。
(3)若用涂布有氨苄青霉素和X-gal的固体培养基筛选上一题中含目的基因的受体菌,下列说法中正确的
有______。(多选)
A.没有导入任何质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为白色 |
B.导入了pXY-1空载体质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为蓝色 |
C.导入了pXY-1重组质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为白色 |
D.导入了pXY-1重组质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为蓝色 |
(4).现从上一题的固体培养基平板上挑取一个重组菌落,经扩大培养后提取质粒,分别用不同的限制性内
切酶处理并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果如表所示:
所用限制性内切酶
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所得条带长度
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BamH I、Sca I双酶切
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1230bp、2770bp
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Hpa II、Sca I双酶切
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460bp、1240bp、xbp
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分别用不同的限制性内
切酶处理并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果如表所示:据此可知,目的基因全长为______bp,在其内部存在______(填限制酶名称)的切割位点,表中字母x代表的数值应为______。