补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。某种大肠杆菌的质粒中含有β-半乳糖苷酶α片段序列，大肠杆菌的DNA分子中则含有β-半乳糖酶ω片段序列，由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有X-gal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个α或ω片段序列，X-gal底物不能转变成蓝色产物。HindⅢ、 EcoRI、BamHI分别为三种限制性内切酶，下图中箭头所指为三种限制酶的切点。
（1）应选用的限制性内切酶是 ，选择的依据是 。
（2）限制酶作用的化学键是 。
（3）控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为 。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有X-gal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为
。
(8分)运用细胞培养技术可以从哺乳动物的早期胚胎中获得胚胎干细胞（ES细胞），如下图所示：
(1)胚胎干细胞除来源于早期胚胎外，还可来源于 。
它在形态上的特性是 ；它在功能上的特性是 。
(2)在体外培养过程中，必须用 处理内细胞团，使之分散成单个细胞，在体外诱导可以定向分化成各种类型的细胞，其分化的原因是 。利用分子杂交技术可以检测细胞分化过程中遗传物质不变，只是表达的基因不同。请简述其检测过程 ，
。
(3)通过ES细胞培育出的人造器官，在临床应用上的最大优点是解决了移植器官和患者之间的
问题。
2001年11月25日，美国先进细胞技术公司利用成人细胞首次克隆出人类早期胚胎，消息公布后，引起全世界的轩然大波；11月29日，中国卫生部明确表示：中国不赞成、不支持、不接受任何克隆人实验，赞成以治疗和预防疾病为目的的人类胚胎干细胞研究，但研究必须是有序的，并要在有效监控条件下进行。试回答：
⑴高等动物的克隆方法一般是：
①“多利”采用了上述技术路线，一般认为这种生殖(繁殖)方式是 生殖。
②a是 过程。 A．有丝分裂 B．细胞融合 C．体外受精 D．细胞杂交
③ b过程在离体条件下进行，除了营养和适宜电脉冲刺激之外，至少还需要
等3个条件；c过程应用了 技术。
④克隆技术的突破说明了 ，
。
⑤ “胚胎干细胞”是指胚胎发育初期具有无限增殖能力和全能分化能力的细胞。中国科学家利用牛胚胎干细胞改进了克隆技术，培育出多头克隆牛，使得工厂化生产克隆动物成为可能，其方法可能是：供体牛的细胞核+去核卵细胞→ → → →许多克隆牛
⑵全世界轩然大波，中国卫生部反对克隆人。为什么 ? （ ）
A．克隆立法相对滞后
B．如果克隆人早期胚胎的试验不加控制地进行下去，克隆人终将涎生
C．克隆人一旦出生,整个人伦方面观念化的东西都被推翻,同时会带来人种优化、宗教混乱等社会政治问题
D．克隆技术并不绝对成熟,不能保证克隆出无缺陷的人
E．大力推广克隆技术对保持生物多样性具有重要意义
下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。
（1） 技术是单克隆抗体技术的基础。
（2）在图中HAT培养上，未有融合的 和融合的 都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。
（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最主要的优点是 。
（4）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的迅速 特点，又具备淋巴细胞的
特点，经过选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行
和 ，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。最后将杂
交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或小鼠腹腔内增殖，从 或
中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。
（5）淋巴细胞是由动物体 中的 细胞分化、发育而来。
下面两幅图分别是单克隆抗体制备过程和克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：
(1)图甲和图乙所示的过程中，都必须用到的动物细胞工程技术手段是 。
(2)图甲中②过程常在 诱导下完成，④过程与体外培养相比，其优点是 。
(3)单克隆抗体能定向攻击癌细胞，主要是利用其 。
(4)若不考虑环境因素影响，克隆羊的性状全部像白面绵羊吗?为什么？ 。
(5)图乙过程的技术具有多种用途，但是不能 ( )
A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优良个体
C．用于保存物种 D．改变动物的核基因
(6)在目前现有技术条件下，还不能将从动物体内分离出来的成熟的体细胞直接培养成一个新个体，而是必须将体细胞的细胞核移植到去核的卵细胞中才能发育成新个体，你认为原因最可能是 ( )
A．卵细胞大，便于操作 B．卵细胞含有的营养物质多
C．卵细胞的细胞质可使体细胞胞核全能性得到表达 D．重组细胞才具有全能性
根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒，回答以下问题：
（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：
……ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC……
……TATCGTACGATAGGTACTTAAGCCGTATG……
红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：
……TCCTAGAATTCTCGGTATGAATTCCATAC……
……AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAGGTATG……
其中， DNA分子含有“目的基因”， DNA分子是“质粒”。
（2）用剪刀代表进行切割。酶切位点在 （a处还是b处），此化学键称为 。请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。
（3）你模拟插入的DNA片断能称得上一个基因吗？ 。EcoRI属于 酶。
（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的 的群体。按照其中所含基因的量又可分为 文库和 文库。
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