为了解基因结构,通常选取一特定长度的线性DNA分子,先用一种限制酶切割,通过电泳技术将单酶水解片段分离,计算相对大小;然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解,分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。
已知一线性DNA序列共有5000bp(bp为碱基对)
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第一步水解
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产物 (单位bp)
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第二步水解
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产物 (单位bp)
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A酶切割
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2100
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将第一步水解产物分离后,分别用B酶切割
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1900 200
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1400
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800 600
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1000
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1000
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500
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500
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B酶切割
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2500
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将第一步水解产物分离后,分别用A酶切割
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1900 600
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1300
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800 500
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1200
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1000 200
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经A酶和B酶同时切割
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1900 1000 800 600 500 200
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(1)该实验设计主要体现了__________________原则。
(2)由实验可知,在这段已知序列上,A酶与B酶的识别序列分别为______个和_____个。
(3)根据表中数据,请在下图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小。
(4)已知BamH Ⅰ与BglⅡ的识别序列及切割位点如下图所示,用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamH Ⅰ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作,若干循环后“AGATCC//TCTAGG”和___________序列明显增多,该过程中DNA连接酶催化_________键的形成。