酶是由活细胞产生的一类具有生物催化作用的有机物，生物体内的化学反应，基本上都是在酶的催化下进行的。请根据下列有关酶促反应的实验操作，回答相关问题。

实验操作	试   管
A	B	C	D	E	F
1．加入质量分数为1%的可溶性淀粉溶液1 mL	+	+	－	－	+	－
2．加入质量分数为2%的蔗糖溶液1 mL	－	－	+	+	－	+
3．加入唾液淀粉酶溶液1 mL	+	－	+	－	－	－
4．加入蔗糖酶溶液1 mL	－	+	－	+	－	－
5．加入蒸馏水1 mL	－	－	－	－	+	+
6．酶促水解反应	摇匀，37℃水浴中保温10min
7．向每个试管中加入斐林试剂2 mL	摇匀，沸水浴中加热1～2min
8．观察并记录各试管内的变化

  注：表中“+”为加入，“－”为未加入
（1）本实验的自变量是___________。
（2）制备淀粉溶液时需加热煮沸，但制备好以后必须冷却到室温才能使用，这是防止    。
（3）上述实验中，_______________号试管能与斐林试剂发生反应生成砖红色沉淀，本实验的结论为__________________________。
（4）实验过程中，E、F号试管起______________作用。如果E、F号试管也出现砖红色沉淀，可能有很多原因，下列分析正确的是（用序号表示）_______________。
①淀粉溶液、蔗糖溶液不纯，混有还原性糖 
②淀粉溶液、蔗糖溶液放置的时间太长，其中的微生物将部分淀粉、蔗糖分解成还原性糖
③试管不干净、上面留有还原性糖
④实验操作过程中，胶头滴管混用、错用
（5）如果条件所限，只保留两支试管，也能初步得出实验结论，请你写出可能的组合：
________________________________________________ 。