白僵菌可感染农业害虫,常作为防治害虫的菌剂。由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感且杀死害虫的能力较弱,科研人员对其进行基因工程改造,流程如图所示。
(1)苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫。已知该基因的全部序列,科研人员通过__________法和PCR技术获得大量毒蛋白基因片段。据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒1的过程需要用到的工具酶是_____________和DNA连接酶。
(2)重组质粒1和Bar基因(草丁膦抗性基因)各自用Xba I 酶处理,得到酶切片段。重组质粒1 的酶切片段再用去磷酸化酶处理,使末端游离的磷酸基团脱离,目的是防止__________。将未用去磷酸化酶处理的Bar 基因与重组质粒1 连接,获得重组质粒2。获得的重组质粒2的是下图中的____________。
(3)将重组质粒2与经 处理过的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒 2在白僵菌细胞内被修复。一段时间后用含有_____________的平板培养基进行筛选,获得含有Bar 基因的重组白僵菌。
(4)提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入_________酶,获得cDNA。在获得的产物中加入毒蛋白基因引物进行PCR反应,用以检测毒蛋白基因是否完成了_______________。
(5)科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的_________,以判断重组白僵菌的杀虫效果。