为增加油菜种子的含油量,研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连,导人油菜细胞并获得了转基因油菜品种。
(1)研究人员依据基因的已知序列设计引物,采用____________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因.从拟南芥基因文库中获取转运肽基因.所含三种限制酶(ClaI、SacI、XbaI)的切点如下图所示。则用___________和_____________酶处理两个基因后,可得到____________(填图中字母)端相连的融合基因。
(2)将上述融合基因插入右上图所示质粒的T-DNA中。构建____________并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含____________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落,再利用培养基震荡培养,可以得到用于转化的浸染液。
(3)剪取油菜的叶片放入染液中一段时间后筛选获得转获因油菜细胞。该细胞通过____________技术,可培育成转基因油菜植株。
(4)提取上述转基因油菜的mRNA.在逆转录酶的作用下获得cDNA,再依据______的DNA片段设计引物进行扩增.对扩增结果进行检侧,可判断融合基因是否完成_____。