（某实验小组用小球藻进行实验，探究影响光合速率的因素。他们将一定量的小球藻浸入适宜且相同温度的培养液的试管中，以白炽灯作为光源。移动台灯可改变光源与试管的距离；CO₂浓度分别设置为0.03%和0.05%，根据实验结果绘制成曲线1、曲线2（如图所示）。请分析回答下列问题：

比较C、D两点的光合速率，可见限制D点光合速率的主要因素是       。
EF段       不再成为光合速率的主要限制因素，若C处突然关闭台灯，叶绿体中C₃含量将如何变化？           。
（2）F点的含义是                                                 。
若用缺镁培养液培养小球藻，其他条件不变，F点应向       移。
（3）该小组又做了探究小球藻最适生长温度的预实验，实验结果见下表：

温度（℃）	10	20	30	40	50
光照下释放O2（mg/h）	9．67	14．67	19．67	21．67	19．33

请根据预实验结果，设计进一步的探究实验：
材料用具：小球藻、大试管、含CO₂缓冲液的培养液、水浴锅（控制温度）、量筒等。
该实验应控制好的两个主要无关变量是：
①                      ；②                            。
实验步骤：
第一步：将                            装入试管，                  浸入试管中，分别放入5个水浴锅中 。
第二步：分组控制温度，                              （温度梯度差为1℃）。
第三步：光照6 h后测定O₂的释放量。