下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题:
限制酶 |
BamH I |
Hind Ⅲ |
EcoR I |
Sma I |
识别序 列及切 割位点 |
ATCC CCTA |
GCTT TTCG |
ATTC CTTA |
CCGG GGCC |
(1)一个图l所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有______个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越_______。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是___________________________________________________。
(4)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入_________酶。
(5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________________________________。
(6)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因,将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体,然后在_________的培养基中培养,以完成目的基因表达的初步检测。