食品卫生检验人员常利用荧光素—荧光素酶生物发光法,测定食物样品中细菌的ATP总含量,从而判断食品污染程度。
实验原理:荧光素在荧光素酶、ATP等物质参与下,进行反应发出荧光;用分光光度计可测定发光强度;ATP的含量与发光强度成正比。
实验步骤:
一、ATP的提取:称取一定量的食物样品,研磨后沸水浴10 min,冷却至室温,离心,取上清液。
二、ATP的测定:吸取一定量的上清液,放入分光光度计反应室内,并注入适量的所需物质,适宜条件下进行反应,记录发光强度并计算ATP含量。
请回答:
(1)步骤一中的沸水浴处理,使酶的____________________被破坏而失活。
(2)步骤二注入的物质中,属于反应物的是__________:分光光度计反应室内能量形式的转换是__________________。
(3)下图为探究“测定ATP时所需荧光索酶溶液的最佳浓度”的实验结果。
①结果表明:e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同,但发光强度相同,这是因为____________________。
②利用上述生物发光法测定食品样品中细菌的ATP总含量,可测算出细菌的数量,做出上述判断的理由是:每个细菌细胞中ATP的含量_________________。