我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛,下图是利用基因工程方法生产重组人生长激素的示意图。图中质粒表示基因工程中经常选用的载体—pBR322质粒,Ampr表示青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因。根据上图回答下列问题(限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同):
(1)过程②必需的酶是 ,过程④必需的酶是 。⑤过程中为提高成功率,常用 溶液处理大肠杆菌。
(2)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对质粒pBR322进行切割,用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时,则形成的DNA片段共 种,其中含有完整四环素抗性基因的DNA片段的比例是 。
(3)如果只用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322,完成过程④、⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌(不含Ampr、Tetr抗性质粒)先接种到甲培养基上,形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落,分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示。接种到甲培养基上的目的是筛选 的大肠杆菌,含有目的基因的大肠杆菌在乙、丙培养基上的存活状态分别是 , 。