基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(细胞)对基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图:
(1)步骤①中,在核移植前应去除卵母细胞的。
(2)步骤②中,重组胚胎培养到期时, 可从其内细胞团分离出细胞。
(3)步骤③中,需要构建含有基因的表达载体。可以根据基因的设计引物,利用技术扩增基因片段。用限制酶分别在片段两侧进行酶切获得基因片段。为将该片段直接连接到表达载体,所选择的表达载体上应具有酶的酶切位点。
(4)为检测基因的表达情况,可提取治疗后小鼠骨髓细胞的,用抗蛋白的抗体进行杂交实验。