图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题:
1.用图1中的外源DNA(含有目的基因D)和图2中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和 。前者(酶)的专一性很强,其作用特点是 。
2.应该使用限制酶BamHⅠ同时处理质粒、外源DNA,而不选择其他3种,原因在于( )。(多选)
A.若使用SmaⅠ或者MspⅠ会破坏目的基因
B.若使用SmaⅠ切割质粒,能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低
C.若使用MboⅠ切割质粒,质粒上会有2处被切开,会将质粒切成两段不利于筛选
D.使用限制酶BamHⅠ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端,以便目的基因和运载体定向连接,不至于反向连接
E.使用BamHⅠ切割质粒,质粒上会有1处被切开,破坏抗生素A抗性基因,保留抗生素B抗性基因,以便于将来筛选含目的基因的受体细胞
F.只有使用BamHⅠ切割,才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端。
3.若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶Sma Ⅰ完全切割,产物中共有 种不同DNA片段。若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒,则可得到 个DNA片段。