下图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。
(1)若用限制酶SmaI完全切割图中含有目的基因D的DNA片段,其产物长度分为
。 若图左DNA分子中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d。从隐形纯合子中分离出图示对应的DNA片段,用限制酶Sma I完全切割,产物中共有
种不同长度的DNA片段。
(2)为了提高试验成功率,需要通过
技术扩增目的基因,以获得目的基因的大量拷贝。在目的基因进行扩增时,加入的引物有A、B两种,若该目的基因扩增n代,则其中含有A、B引物的DNA分子有
个。
(3)若将图中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是
。
(4)为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,首先将大肠杆菌在含
的培养基上培养,得到如图示的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含
的培养基上培养,得到如图2的结果(空圈表示与图1对照无菌落的位置)。挑选目的菌的位置为
。
(5)若目的基因在工程菌中表达产物是一条多肽链,如考虑终止密码,则其至少含有的氧原子数为
。