肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。
(1)进行过程①时，需用 酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用 酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于 细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2+)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为 。
(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 (RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。
(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为 。
(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：
| 限制酶 |
片段及长度 |
| Hind Ⅲ |
2.5 kb，5.0 kb |
| Sma I |
2.0 kb，5.5 kb |
| Hind Ⅲ和Sma I |
2.5 kb，3.0 kb，2.0 kb |
可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有 个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为 的片段。
已知某种传染病是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。该病毒表面的A蛋白是主要的病毒抗原，在病人康复后的血清中有抗A蛋白的特异性抗体。某研究小组为了了解这种蛋白质的结构和功能，需要更多的A蛋白作为研究材料，研究小组开展了下图所示的工作：
（1）步骤③构建重组表达载体A和B时，必须使用＿＿＿＿＿＿＿＿酶和＿＿＿＿＿＿＿酶，后者的作用是将前者切割的A基因和＿＿＿＿连接起来。
（2）为了检验步骤⑥所表达的A蛋白是否与病毒A蛋白有相同的免疫反应特性，可用大肠杆菌中表达的A蛋白与感染过该病毒的康复病人的血清进行＿＿＿＿＿＿＿＿反应，从而得出结论。
（3）步骤⑥和⑦的结果相比，原核细胞表达的A蛋白
与真核细胞表达的A蛋白的氨基酸序列相同吗？＿＿＿＿。
为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻， 
培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答：
（1）图中基因组文库＿＿＿＿（小于/等于/大于）cDNA文库。（2）B过程需要的酶是＿＿＿＿＿＿＿＿；A、C过程中＿＿＿＿（可以/不可以）使用同一种探针筛选含目的基因的菌株。（3）目的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中＿＿＿＿和＿＿＿＿为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是＿＿＿＿＿＿＿＿。
尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题： 
（1）此培养基能否用于植物组织培养？＿＿＿＿，理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选＿＿＿＿＿＿，这种培养基
属于＿＿＿＿培养基。
（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的＿＿＿＿和＿＿＿＿，实验需要振荡培养，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
（4）下列材料或用具：①培养细菌用的培养基与培养皿，②玻棒、试管、锥形瓶和吸管，③实验操作者的双手。其中需要灭菌的是：＿＿＿＿；需要消毒的是：＿＿＿＿。（填序号）
（5）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有＿＿＿＿（填序号）
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照
（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行＿＿＿＿处理后，才能倒掉。
(8分)某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。
（1）采样与培养：将采集的土样混匀后称取lg，置于经过＿＿＿＿＿＿＿法灭菌处理的＿＿＿＿（填“固体”或“液体”）培养基中，28℃振荡培养。
（2）接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行＿＿＿＿＿＿＿＿处理。之后，将菌液涂布接种于以＿＿＿＿为唯一碳源的固体培养基上，30℃条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈＿＿＿＿状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿作为空白对照。
（3）筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是＿＿＿＿＿＿＿＿，则说明此种菌能够＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
【生物—生物技术实践】
尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：
（1）右图是利用 法进行微生物接种，把聚焦的菌种逐步 分散到培养基的表面。
（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行 。
（3）下表是一种培养基配方
| 成分 |
KH2PO4 |
Na2HPO4 |
MgSO47H2O |
葡萄糖 |
尿素 |
琼脂 |
| 含量 |
1.4g |
2.1g |
0.2g |
10.0g |
1.0g |
15.0g |
①配制培养基的操作步骤（ ）
a.调节pH b．计算 c.溶化 d.称量 e.灭菌
A．a→b→c→d→e B.e→b→d→c→a
C.b→d→c→a→e D.b→d→c→e→a
②该培养基属于 培养基（多选）。
A．液体 B．固体 C．鉴定 D．选择 E.天然
③使用该培养基的目的是 。
④在培养基中加入 指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。
（4）在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有 。（多选）
A．由于土样不同 B．由于培养基污染 C．由于操作失误 D．没有设置对照
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