下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5五个区域依次进行。下列叙述正确的是

A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌

B．划线操作时打开皿盖，划完立即盖上

C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的

D．第1区和第5区的划线最终要相连接起来，以便比较前后的菌落数