受损伤的马铃薯细胞内酚氧化酶(PPO)和底物(酚类物质)直接接触,引起马铃薯的褐变,为探究温度对PPO活性的影响,实验小组进行如下实验:
(1)PPO粗提液的提取
低温下将新鲜马铃薯用蒸馏水洗净、去皮,取20g样品放入含50mL磷酸缓冲液(PH值为5.5)的研钵中,同时加入少量石英砂,研磨、离心、上清液即为PPO的粗提液,加缓冲液研磨的目的是
(2)不同温度下PPO活性的测定
步骤顺序
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试管1
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试管2
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试管3
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试管4
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试管5
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试管61
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试管7
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试管8
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PPO粗提液
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2mL
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2mL
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2mL
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2mL
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酚类底物
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2mL
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2mL
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2mL
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2mL
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反应
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混合振荡
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混合振荡
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混合振荡
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混合振荡
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温度预处理(5min)
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0℃
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15℃
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30℃
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45℃
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保温时间
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5min
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5min
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5min
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5min
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记录结果
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+
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++++
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++++
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++
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(注:反应底物充足;实验结果中“+”越多褐色越深)
①实验步骤顺序有不妥之处,请改正。
②实验结果表明:15℃和30℃温度条件,PPO具有相同的活性,从酶的特性分析其原因是。
③为进一步探究PPO最适温度,应在范围内设置温度梯度。