融合蛋白是通过DNA重组技术将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制合成的蛋白质。人的表皮生长因子受体(EGFR)是影响癌症发生发展的重要因素,它在肺癌、脑肿瘤等实体瘤中均有大量表达。天花粉蛋白(TCS)是重要天花粉的有效成分,具有抗肿瘤作用。下图是通过基因工程方法将人表皮生长因子基因(EGF)和TCS基因连接起来,利用大肠杆菌生成人表皮生长因子—天花粉蛋白融合蛋白的过程示意图。请回答:
(1)为了建立含有EGF的cDNA文库,应从健康人体的 细胞中提取总mRNA,通过 法合成cDNA。从cDNA文库中提取的EGF的长度比从基因组文库中提取的EGF短。利用 技术可以大量扩增EGF,该技术所利用的原理是 。
(2)在①过程中,应使用的限制酶是 ,在融合蛋白基因的首端还应
插入 ,它是 识别和结合的位点。
(3)在②过程中,首先用_________________处理大肠杆菌,使其转变为_________________细胞。
(4)应用___________________ _技术可检测大肠杆菌是否表达出融合蛋白。
(5) 单纯使用天花粉蛋白治疗癌症疗效甚微,而人表皮生长因子——天花粉蛋白融合蛋白疗效显著,其原因是 。
(6)某同学为了筛选插入目的基因的表达载体,将处理过的载体分别置于含有氨苄青霉素和四环素的培养基上培养,观察其增殖和表达情况。此设计方案是否合理, 请说明理由 。