海洋中的发光细菌具独特的生理特性,可作为环境监测的指标生物。
I.(1)对发光细菌纯化、培养常用 法接种(答一种)。实验结束后。对使用过的培养基应进行 处理。
(2)通过PCR技术扩增发光基因的三个步骤是: 。
Ⅱ.现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测,请完善下列实验设计并回答问题:
实验原理:细菌代谢正常时,发光强度稳定:当重金属影响到其代谢时,发光会受到抑制,抑制程度用抑光率(发光被抑制的百分率)表示。
实验材料:明亮发光杆菌冻干粉、待测海水水样、2%NaCl溶液、3%NaCl溶液、荧光分光光度计(用于测定细菌发光强度)、试管等。
实验步骤:
(1)配制发光菌悬液:将少许明亮发光杆菌冻干粉和0.5mL 2%NaCl溶液加入5mL小试管中,摇匀。
(2)抑光反应:按照下表配制海水样品稀释液。
组别
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1
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2
|
3
|
4
|
5
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3%N aCl溶液(ml)
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4.74
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4.49
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4.24
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3.99
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海水样品(ml)
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0.25
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0.50
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0.75
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1.00
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发光菌悬液(ml)
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0.01
|
0.01
|
0.01
|
0.01
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混合液中海水浓度(%)
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0.05
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0.10
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0.15
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0.20
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①l号试管中应加入:3%NaCl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为 mL。
②各试管静置15min后, 。
(3)计算相对抑光率:按照公式T%= 计算各组相对抑光率。
(4)如果测得上述各组相对抑光率如下
组别
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1
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2
|
3
|
4
|
5
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相对抑光率(%)
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0
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6
|
13
|
17
|
23
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①请绘制随海水浓度变化相对抑光率的变化曲线。
②根据结果可以判断待测样品 。