科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是                      。
（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的     基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
（3）步骤③是                 的过程。为了促进该过程，应该用      处理大肠杆菌。
（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选                                        。能在C中生长的大肠杆菌有      种。
（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”）      上，请在图中相应的位置上圈出来。