血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。
(1)将实验流程补充完整:A为 ,B为 。凝胶色谱法的基本原理是根据 而达到蛋白质分离的有效方法。
(2)洗涤红细胞的目的是去除 ,洗涤次数过少,无法除去 ;离心速度过高和时间过长会使 一同沉淀。达不到分离的效果。洗涤干净的标志是 。释放血红蛋白的过程中起作用的是 。
(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是 。如果红色区带 ,说明色谱柱制作成功。
(4)右图为填充的凝胶色谱柱,据图回答以下问题:
①自己制作凝胶色谱柱时,在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构由 替代。
②装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡存在,原因是 。
③洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体 (填“相同”或“不同”),洗脱时,对洗脱液的流速要求是 。